动物造模,药效评价,干眼模型 z-bio 2024-08-07 119

　　1．睑板腺功能障碍性蒸发过强型兔干眼模型  一些特殊类型的鼠本身就存在睑板腺发育障碍的因素。Rhino鼠出生后不久，由于存在上皮变异及发育异常，睑板腺导管上皮会出现增厚及过度角化，从而产生睑板腺功能障碍。给鼠注射人单克隆抗DNA抗体，可以产生慢性睑缘炎，并可使睑板腺过度增生，睑板腺中炎症细胞浸润，也可导致睑板腺功能障碍产生。

　　2．环境因素导致蒸发过强型鼠干眼模型  Barabino等将8～12周龄的BALB／c雌鼠放入相对湿度、温度和空气气流恒定的干燥环境(人工气候室)中，其干燥环境设定：相对湿度18.5％±5.1％，温度21～23℃，空气气流15L／min；对照组同种同龄鼠放入正常环境中，设定：相对湿度50％～80％，温度21～23℃，无空气气流。作者观察放置于干燥环境的鼠在第3、第7、第14、第28天，泪液分泌量均显著减少，角膜荧光素染色以中央区和鼻侧为主；结膜组织切片示上皮细胞层数增加，外层增厚，杯状细胞密度明显降低。在有些实验中研究者为加快动物泪液蒸发，将动物连续面对风扇等鼓风装置及持续气流，而此方法中作者将干燥环境设定及检查方式更加优化和细化，避免了动物因紧张所致对泪膜稳定性的影响。

　　Nakamura等用手术刀片刮擦雄鼠角膜上皮中央区，后将其放入相对湿度、温度和空气流量都恒定的干燥房间内，发现第2、第6、第12小时的泪液分泌量即比正常对照组有显著降低，第6小时出现环绕原刮伤区的轻微角膜染色，第12小时进展扩大为斑块状。组织病理检查发现在原伤口的周边有角膜上皮细胞脱落变薄，免疫组化示第6小时角膜上皮明显凋亡。

　　3．暴露因素导致蒸发过强型鼠干眼模型  眼睑缝线暴露为例介绍具体操作方法：Wistar大鼠，氯胺酮与地西泮等量混合腹腔注射全身麻醉，1号黑丝线分别褥式缝合上、下眼睑并固定至眼周相应皮肤，使角膜充分暴露，标记大鼠并计时。

　　田明霞等制作了上述暴露性干眼症大鼠模型，荧光素染色得分结果表明此模型眼表损害随着暴露时间的延长而加重，Schirmet试验结果亦表明，随着暴露时间的延长，泪液有代偿性分泌增加的趋势，但暴露24h以后，却出现了减少的现象，这可能与泪液蒸发过度和泪腺的功能不足有关。此种模型建立简便易行，能在短期内出现干眼症的眼表改变，为进一步研究干眼症的发病机制及治疗方法提供方便。

　　4．泪液动力型鼠干眼模型  Nakamura建立了一种比较有创意的诱导泪液动力学异常的模型，把雌鼠放在悬空的塑料管上，迎面接受固定的空气流，每天>15h，其余时间放在干燥的笼子里，连续10d。结果示眨眼频率明显降低，荧光素残留量增加明显，泪液分泌减少。角膜荧光素染色评分与对照组差异显著，形态同人类的浅层点状角膜病类似。组织病理上表现出角膜上皮变薄，基质细胞大小和排列异常。第10天，显微镜下的角膜上皮和基质层变薄，通透性明显增加。电镜下很少见有微绒毛和微皱褶的明亮细胞。该模型的原理是，双眼的固视功能在保持身体平衡方面起了重要作用，雌鼠为了在塑料管保持平衡，迫使双眼向前持续的固视，眨眼减少，眼表暴露时间延长，最终导致泪液排泄率的下降。这就与面对荧屏、开车、阅读等长时间用眼引起的浅层点状角膜病变类似。以上的观测表明了该病的发病机制不仅包括了角膜上皮完整性的改变，而且还涉及其异常的分化。

　　5．药物联合环境因素导致泪液缺乏和蒸发过强混合型鼠干眼模型  以Suwan-apichon O等经结膜泪腺内注射肉毒杆菌毒素(Botulinum Toxin，BTX)联合环境因素制作模型为例介绍具体方法：6～8周龄雌性(CBA／J鼠，麻醉满意后，于手术显微镜下，经结膜用细针(33号针)向泪腺内注射肉毒杆菌毒素B(BTX-B)20毫单位(0.05ml)；将鼠笼放于鼓风机装置前，控制鼓风机流量(400ft／min)，1天5h，1周5d，恒定环境温度和湿度(70～750F，20％～35％)。

　　泪腺的分泌受自主神经调节，其中副交感神经起主要作用。肉毒杆菌毒素抑制了副交感神经末梢钙离子介导的乙酰胆碱的释放，致使腺泡发生去神经性萎缩，泪液分泌减少，从而产生干眼表现，一些研究表明BTX-B比BTX-A起效快且作用弥散。Suwan-apichon O等采用上述方法向CBA／J鼠泪腺内注射肉毒杆菌毒素B 3d后，即出现泪液分泌量减少及角膜荧光染色，其中泪液分泌减少持续至少2～4周，8周时可出现短暂反跳现象，泪液分泌量有所增加，但在10周时恢复至正常，而角膜荧光染色持续存在；附加环境因素加重角膜上皮的损害；病理组织学检查泪腺及结膜组织均未见炎症细胞的浸润。此种方法简单易行、方便快速，不用频繁重复给药，局部给药全身不良反应小，制作的干眼模型持续时间长，稳定可靠，模拟了人类非Sjögren综合征慢性病程。

　　也有很多学者通过经鼠皮肤安装东莨菪碱装置或每天3～4次皮下注射东莨菪碱抑制鼠泪液产生，同时将这些鼠放置在一鼓风装置制造的干燥环境中，发现可以较快地产生干眼模型。东莨菪碱的作用是阻断泪腺的胆碱能受体从而减少泪液的分泌，持续气流的作用则是加快泪液蒸发。这种混合型动物模型也不伴有自身免疫功能的异常，是一个较好的模型，有待进一步优化。