动物造模,药效评价,变应性结膜炎 z-bio 2024-08-02 185

　　【造模机制】眼部变态反应主要是肥大细胞介导的Ⅰ型变态反应。枯草热性结膜炎、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、巨乳头状角膜结膜炎等主要参与Ⅰ型变态反应。用于诱发Ⅰ型变态反应的方法很多，这里主要介绍卵清蛋白诱发的主动变应性结膜炎(allergic conjunctivitis)。将卵清蛋白给实验动物腹腔注射，使其产生IgE抗体，IgE与结膜组织中肥大细胞的Fe受体结合而主动致敏。当用抗原进行局部攻击时，引起激活的肥大细胞脱颗粒释放过敏介质，从而使局部血管的通透性增加，并伴有局部嗜酸细胞浸润。注入伊文思蓝，可渗出于眼组织内，引起组织水肿，根据结膜水肿程度、嗜酸细胞浸润及肥大细胞脱颗粒程度以及结膜组织提取液的光密度，判定血管通透性变化，以反映结膜变态反应的程度。DL-二巯基苏糖醇(DDT)是黏液溶解剂，它可破坏结膜黏液屏障功能，使卵清蛋白这种大分子物质可以穿透入结膜，与组织内的 IgE抗体结合，增强眼部变态反应。

　　【造模方法】给大鼠或豚鼠腹腔注射卵清蛋白磷酸缓冲液(PBS)1ml(含卵清蛋白100μg，硫酸铝钾10～20mg，pH 7.4)免疫。14天后，各眼滴1mol/L DDT 10～20μl，以消除结膜黏液屏障，提高攻击效果。15分钟后，对于判断血管通透性变化的动物，静脉注入(0.125mg/100g)溶液1ml。并立即用5％卵清蛋白PBS液10μl滴眼攻击；对于判断临床及组织学改变的动物，仅用5％卵清蛋白PBS液10μl滴眼攻击，不注射伊文思蓝。局部抗原攻击后30分钟，裂隙灯下判断组织反应，用下列记分法对反应定量(每眼最多10分)：

　　1．充血(睑结膜和球结膜)  0：正常；1：结膜呈粉色；2：结膜呈红色；3：结膜呈暗红色，有瘀点、瘀斑。

　　2．水肿  0：无；1：仅下眼睑水肿；2：上下眼睑均水肿，眼睑部分闭合；3：眼睑外翻，水肿明显，眼睑至少半关闭；4：上下睑及睑缘均水肿。

　　3．分泌物  0：无；1：稀黏液状；2：眼睑及周围的毛发潮湿；3：眼睑及周围的毛发潮湿，稠黏液状。

　　血管通透性判断：抗原攻击后20～30分钟，处死动物，摘除眼睑、结膜和眼球，去除脂肪组织，称重。将组织分别置于0.5％硫酸钠和丙酮混合液(3：7混合)5～10ml中，室温下振荡，24小时后，将溶液于300r/min离心10分钟，吸取上清液用分光光度计在620nm处测定光密度，依组织称重换算为伊文思蓝含量μg/g。

　　组织学检查：抗原攻击后30分钟切除上方球结膜制备光镜标本，将组织固定在Karnovsky固定液中，乙醇梯度脱水，异丁烯酸乙二醇包埋，切片厚2μm，H&E、PAS及碱性Giemsa染色，光镜观察。用网格为0.25mm×0.025mm网状计数尺在3个不同的视野内对结膜上皮、上皮下组织及基质组织中的肥大细胞和嗜酸细胞计数。

　　【模型特点】造模阳性的组织学检查可见，结膜上皮内及基质内嗜酸细胞大量浸润，脱颗粒的肥大细胞明显增多；脱颗粒肥大细胞与肥大细胞总数之比值明显增高。

　　【模型评估和应用】本法是抗Ⅰ型变态反应药物常用的筛选方法，方法客观、简便、快速(攻击后10分钟即出现明显的结膜炎症状，30分钟达高峰，1小时后消失)并定量，筛选的结果与临床效果基本吻合。给药途径与给药时间由受试药物的药效学与药动学特点决定。