动物造模,药效评价,慢性癫痫 z-bio 2024-08-02 106

　　慢性癫痫模型能够反映癫痫发作的起始、发展以及伴随的脑部病理生理的改变。这为更加深入研究癫痫提供了基础。根据给予刺激的强度和诱发的病情程度的不同，可分为点燃模型、持续性癫痫模型和自发性癫痫模型。

　　(一)点燃模型

　　【造模机制】点燃模型是指重复初始的亚惊厥剂量的刺激(电/化学药物刺激)丘脑和海马等部位，逐渐降低惊厥发作阈值并提高敏感性，经历一个从部分性发作(1～3级)到全身发作(4～5级)的慢性过程，最终表现为反复、自发发作。

　　【造模方法和模型特点】

　　1．电刺激点燃模型  是研究癫痫发生机制使用最多的复杂部分性模型。能否出现点燃取决于刺激持续时间、强度、刺激间隔时间等参数。标准的刺激条件为电流强度3mA，持续2秒，1次/日(小鼠)；8mA，持续4秒，2次，日(大鼠)，直至出现5级发作，即被认为达到完全点燃。选取连续10次达到5级发作的大鼠用于筛选抗痫药及机制研究。点燃过程可分为6个阶段：①同侧面部抽搐；②两侧面部抽搐；③点头；④对侧前肢出现阵挛；⑤站立伴阵挛性跳跃；⑥摔倒伴全身强直一阵挛发作。电刺激脑部许多部位可引起点燃，最易点燃部位为杏仁核，其次为新皮质区和海马。

　　2．化学点燃模型-马桑内酯点燃模型  马桑内酯(coriaria lactone)1.25～1.75mg/kg肌内或腹腔注射，1次/84小时，平均为15次(7～20次)。第8次给药后，动物出现凝视、呼吸急促、外耳静脉扩张，之后发展为运动不协调、面部抽搐、触须抖动、前肢抽动(发作级别为1～3级)，伴有棘波和多棘波。完全点燃大鼠表现为站立伴双上肢抽动(4级)和失去姿势平衡、摔倒(5级)，最终表现为全身强直-阵挛发作，持续10～20秒，脑电图(EEG)表现为高波幅痫性放电。该模型病理改变主要为海马区星形胶质细胞明显变性、坏死，提示马桑内酯对星形胶质细胞和大脑皮质细胞有损伤性作用，该损伤可能在诱导癫痫发作中起一定作用。该模型建立简便，点燃效率高，死亡率低，适于推广。

　　【模型评估和应用】点燃模型行为规范，可控性和重复性好，易于判断与定量研究。为研究人类癫痫发生机制、药物有效性及抗癫痫药物耐药的分子机制，寻找新的或更有效的治疗药物，提供了一个理想的动物模型。此模型较好地模拟了人类癫痫发生、扩布和形成的全过程，因此，被认为是更为接近人类癫痫的慢性模型。点燃模型被广泛用于寻找治疗部分性发作的新药，在点燃过程中预先给予所测试的药物，观察该药物能否阻止或延缓点燃现象的发生，以检测该药是否具有抗惊厥作用和(或)抗癫痫灶形成的作用。

　　(二)持续性癫痫模型和自发性癫痫模型

　　1．Lithium-Pilocarpine模型

　　【造模机制】Lithium(锂)-Pilocarpine(匹罗卡品)模型是目前应用最多的癫痫持续状态模型及自发发作模型。Pilocarpine为胆碱能肌肉激动剂，全身给药可引起癫痫发作。氯化锂用来提高机体对 pilocarpine敏感性。

　　【造模方法和模型特点】Lithium 125mg/kg腹腔注射，18～24小时后，pilocarpine 30mg/kg腹腔注射。给pilocarpine前30分钟，腹腔注射东莨菪碱1mg/kg，以减轻外周症状。其发生发展过程可分为急性期、静止期、慢性期。急性期：表现为癫痫持续状态，持续24小时。惊厥行为反应级别采用 Racine分级标准。静止期：发作完全停止，恢复正常进食与活动，体重回升，部分易激惹，有攻击行为；EEG正常；持续4～44天。慢性期：出现反复自发性的癫痫发作，相当于点燃模型的4～5级，持续数秒至数十秒，2～3次/周。Lithium-Pilocarpine模型与年龄具有高度相关性，在成年鼠诱导后，100％可出现自发性的癫痫发作，潜伏期为(15±3)天，神经元损害主要位于海马、丘脑、梨状核、新皮层；在18～24天龄大鼠诱导SE后，22％可出现自发性的癫痫发作，潜伏期为(37±25)天，神经病理改变与成年鼠相同，在7～11天大鼠诱导后，无自发性的癫痫发作，无神经损害。

　　【模型评估和应用】参见海人酸模型。

　　2．海人酸模型

　　【造模机制】海人酸(kainic acid,KA)结构类似谷氨酸，能产生很强的神经兴奋作用。KA与突触后膜的海人酸受体结合，产生兴奋性突触后电位，引起癫痫发作。

　　【造模方法和模型特点】全身给药(静脉或腹腔注射)，KA 4mg/kg；局部给药(脑室内、单侧或双侧海马、杏仁核、梨状核、纹状体等)0.1～2.0μg。根据症状表现可分为急性期(注射后4～7天)、静止期(急性期后4～7天)、慢性期。急性期(癫痫持续状态)：注射KA几分钟后，出现须动、面部肌肉抽动、尾巴翘起，之后为凝视、点头、咀嚼、双上肢抖动，最终发展为向对侧翻滚、全身强直，持续3～5小时。静止期：发作完全停止，恢复正常进食与活动，体重回升，部分大鼠易激惹，有攻击行为。慢性期(自发发作)：自发性反复的癫痫发作是这一时期的主要特点。发作类似于杏仁核点燃发作，持续40～60秒，表现为流涎、咀嚼、双上肢阵挛性抽动、湿狗样抖动、战立、失去姿势平衡而摔倒。

　　【模型评估和应用】Lithium-Pilocarpine和KA模型发生发展过程与人类颞叶癫痫高度相似，具有相同的病理学基础(神经元丢失、胶质细胞增生、苔藓纤维丝状芽生等)，对大部分抗癫痫药物耐药，被广泛应用于抗癫痫药物耐药机制及癫痫发生的分子机制研究中。