动物造模,药效评价,缺血性急性肾衰竭 z-bio 2024-08-01 161

　　【造模机制】切除右肾并夹闭左肾动脉，造成肾缺血性线粒体功能障碍，产生大量次黄嘌呤。缺氧条件下，次黄嘌呤不能代谢为黄嘌呤而大量堆积，一旦血流再灌注，次黄嘌呤代谢为嘌呤并进一步代谢为尿酸，产生大量超氧阴离子，进一步产生羟自由基和H2O2，通过膜的脂质过氧化对肾脏造成损害，导致细胞坏死和脏器功能减退。

　　【造模方法】

　　1．选用体重180～220g雄性Sprague Dawley大鼠。戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉，使大鼠仰卧位固定于手术台上，腹部去毛后以苯扎溴铵(新洁尔灭)局部消毒，沿腹正中线纵向切口打开腹腔，先暴露右肾，在显微镜下分离出右肾蒂及右输尿管，以10#丝线分别结扎整个肾蒂和右输尿管并取下右肾。暴露左肾并分离出左肾蒂，用无创伤性夹钳夹闭肾蒂60分钟后，松夹恢复肾灌注，此时肾脏颜色先由鲜红色转为苍白或暗红色，再变成鲜红色，表明再灌注成功。观察术野无出血和渗血后逐层缝合关闭腹腔。假手术组麻醉、打开腹腔等方式均同上，暴露左右两肾后钝性分离肾包膜即可。

　　2．肾功能检测

　　分别在第1、6、12、24、36小时采集尾静脉血测定BUN、Cr浓度。形态学观察：手术后36小时取下残肾置入4％中性甲醛溶液固定24小时后梯度乙醇脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋、连续切片，H&E染色。

　　【模型特点】造模大鼠血清Cr和BUN浓度在6小时后开始显著上升。并于24小时达高峰，以后逐渐下降，提示急性肾衰竭动物模型建立成功。再灌注确切。形态学上，假手术组光镜下基本正常， ARF组肾小球无明显异常，近曲小管上皮细胞出现崩解、坏死、脱落，管腔内可见细胞碎片及管型，管腔扩张，远端小管内形成大量蛋白，坏死脱落细胞形成细胞管型，组织结构松散，尿液外渗。肾小管管型程度和损伤程度指数明显升高。

　　【模型评估和应用】急性肾衰竭动物模型的建立方法较多，主要有两大类：缺血性和肾毒性。采用切除大鼠右肾并夹闭左肾动脉方法建立的缺血性ARF具有简便有效、成功率高的优点，而且肾功能和肾小管等形态学病理改变典型、稳定，主要用来研究ARF发病机制和氧自由基清除剂对ARF的防治作用。