动物造模,药效评价,转基因宫颈癌 z-bio 2024-08-01 235

　　【造模机制】HPV目前已鉴定出的超过200多种亚型，约40种亚型能感染生殖道，以性接触方式传播。HPV感染和宫颈癌的发生具有直接关系，高危型HPV可以与宿主染色体整合，是宫颈早期癌变/癌前病变最直接的始动因素。HPV16型、18型E6和E7基因已被证实是转化基因，其编码的 E6、E7蛋白在宫颈癌细胞系和癌组织细胞内持续表达，并在维持转化组织恶性表型的过程中起着至关重要的作用。HPV病毒的E6、E7蛋白可与p53、 Rb相互作用，其中E6蛋白通过细胞泛素连接酶 E6AP与p53结合，导致抑癌基因p53降解，破坏了 p53介导的P14-MDM2-p53途径，失去正常调控引起细胞无限增殖；E7蛋白竞争优先与pRb结合，使 pRb与E2F解离，游离E2F增多，导致P16-cyclinD- CDK4/6-pRb-E2F途径调控失调，启动G1-S期进展，引起细胞无限增殖。

　　【造模方法】从人宫颈癌组织中提取HPV16E6/7基因，以pCEP4载体为骨架，用人巨细胞病毒启动子启动下游基因表达。将经线性化的包含人巨细胞病毒启动子、HPV16E6/7目的基因、SV40PolyA尾的DNA部分，通过将外源基因显微注射到供体小鼠受精卵的雄原核中，再植入假孕受体鼠的输卵管中，获得稳定遗传的HPV16E6/7转基因鼠。

　　HPV16转基因鼠的建立始于20世纪90年代，1994年Arbeit等人用K14启动子建立了HPV16进展型鳞状上皮肿瘤转基因鼠，同年Sasagawa等人建立了HPV16 E6/7宫颈、阴道不典型增生转基因鼠，1996年Herber等人用HPV16E7癌基因建立了鳞状上皮增生和癌的转基因鼠，2000年Shiyu Song等人用IHIN启动子建立了表达HPV16 E6、E7蛋白的转基因鼠等。

　　【模型特点】该模型鼠大约4～6个月开始出现皮肤不典型增生，18个月左右几乎所有小鼠死于宫颈癌、皮肤癌、眼癌、横纹肌肉瘤等恶性肿瘤。

　　【模型评估和应用】HPV转基因鼠主要采用皮肤特异性启动子启动下游基因表达，所以得到的肿瘤模型以鳞状上皮肿瘤为主；若采用的CMV启动子为通用启动子，在多数细胞、组织中都能表现出很强的活性，会得到多种组织起源的肿瘤。建立的HPV转基因模型鼠存活时间较长，能够有足够的时间得到足够数量的小鼠以对其进行深入的致癌机制研究，同时也利于模型鼠的推广和应用。利用显微注射技术建立HPV16E6/7转基因小鼠病理模型，将为进一步研究HPV的致癌性及HPV与机体的相互作用关系，为HPV感染相关疾病的研究、皮肤癌和宫颈癌的治疗以及HPV疫苗评价提供动物模型系统，在预防我国HPV感染性疾病方面将会有潜在的应用价值。

　　随着转基因、基因敲除等技术在实验动物模型中的广泛应用，实验动物的品种、品系及具有人类疾病特征的动物模型种类也快速增长，建立理想的宫颈癌动物模型，对进一步了解宫颈癌的发病机制，从而对其有效预防和治疗将起关键作用。