动物造模,药效评价,HCV感染模型 z-bio 2024-07-26 130

　　1.建模方法

　　(1)实验动物：4～6周龄清洁级雄性SD大鼠，体重113.2±1.8g。

　　(2)毒株：用PCR扩增出丙型肝炎病毒核心区cDNA(HCV-Core)，以重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)载体介导的病毒重组技术制备含HCV-Core的重组腺伴随病毒。重组腺伴随病毒效价为2.41×10的11次方/ml。

　　感染方法：20只大鼠麻醉后切除40％肝，在剩余肝叶内直接注射含HCV-Core基因rAAV 20μl，另取20大鼠，以同样的手术程序，注入空载体rAAV作为对照。术后常规饲养。

　　2.建模结果  在术后1和4个月分别安乐处死大鼠10只，取肝组织进行Southern blotting和Dot blotting杂交，测鼠肝内HCV-Core区基因整合、mRNA表达情况。HCV-Core区基因非定点整合，肝细胞mRNA的Dot blot杂交结果均为阳性，有HCV-Core mRNA表达。

　　综上，理想的动物模型是研究人类疾病、评价治疗策略和药物安全性的工具。而由于人和黑猩猩之外的动物对HCV敏感性的低下，限制了动物模型的建立。

　　在研究HCV与人的相互作用、HCV感染导致的肝病理中，表达HCV蛋白的转基因小鼠模型具有一定应用价值，但它不是真正意义上的动物模型，不能用于HCV的生活周期、病毒进入和复制以及抗病毒药物和疫苗的开发等方面的研究。理想的小鼠模型应该支持 HCV的感染。研究者们已经确定了决定病毒的宿主范围和组织嗜性的细胞表面受体蛋白。 HCV与其受体的相互作用涉及许多步骤，病毒同时或顺序利用数种受体来结合到细胞表面，然后进入到细胞内部。有趣的是，HCV虽然不能感染小鼠的肝细胞，但是HCV却可以在小鼠的肝癌细胞系中复制。未来解决HCV可感染的宿主范围狭窄的关键，可能依赖于建立表达人HCV受体蛋白的转基因小鼠。CD81是HCV感染的受体之一，然而，肝中表达人CD81蛋白的转基因小鼠对HCV并不敏感，这表明人的CD81蛋白并非是HCV感染小鼠时的唯一决定因素。因此，构建能允许HCV感染的转基因小鼠就需要同时表达数种人的HCV受体蛋白，诸如SCARB1，CLDN1和OCLN等。此外，建立可感染HCV的转基因小鼠模型有助于我们更好的理解HCV感染中的免疫病理机制。