动物造模,药效评价 z-bio 2024-07-24 125

　　巴贝斯虫属于焦虫类，又称梨浆虫。其传播媒介均为蜱。温血实验动物中的焦虫类寄生虫有好几个属，其中巴贝斯属最重要。迄今为止发现的所有人体巴贝斯虫病病例，可能都起源于动物。有几种巴贝斯虫能感染人，其病例数量十分少，说明大多数个体对临床发病有抵抗力。如果巴贝斯虫对人体的毒力不会发生意外的变化，那么，可能仍然是一个稀少但却值得重视的问题。吉氏巴贝斯虫是一种严重危害犬、狐、狼等动物的血液寄生性原虫。我国主要在河南、江苏等部分地区呈地方性流行。王省良等进行过实验感染犬吉氏巴贝斯虫病的临床观察和犬红细胞内吉氏巴贝斯虫的形态学观察；董君艳等进行过犬吉氏巴贝斯虫的人工感染试验，认为，吉氏巴贝斯虫对摘脾犬和非摘脾犬均有致病性，但致病程度有差异；张守发等根据Tsuji M等利用SCID鼠作模型，成功地建立了牛巴贝斯虫和泰勒焦虫的实验动物模型，以及根据 Arai S等建立的置换犬红细胞SCID鼠的方法，成功地感染了犬巴贝斯虫等这些建模思路，进行了吉氏巴贝斯虫感染SCID鼠模型研究，认为，置换犬红细胞的SCID鼠是目前最适用于吉氏巴贝斯虫增殖的实验动物模型。

　　(1)复制方法  ①选取正常SCID鼠，5～10周龄。麻醉后切除脾脏，待术部完全愈合后用于置换犬红细胞和人工感染吉氏巴贝斯虫。②犬血清：无菌采取正常犬血液，制备犬血清，-20℃保存备用。③犬红细胞：无菌采取正常犬脱纤血液，以PBS 1500r/min离心10min，洗涤3次。加等量正常犬血清悬浮。④置换犬红细胞SCID鼠：按0.5ml/只对SCID鼠腹腔内注射，隔日1次，连续注射3～4次。⑤感染：取经PBS洗涤并已感染吉氏巴贝斯虫的犬红细胞(感染率约为10％)，加入等量正常犬血清悬浮，以0.5ml/只的量接种于已置换犬红细胞的SCID鼠腹腔内，之后每隔2日腹腔内注射正常犬血清－犬红细胞悬浮液。

　　(2)模型特点  感染后第4日，可在末梢血液中出现少量虫体；第7～8日增殖型虫体增多；第10～12日，红细胞染虫率可达12％左右；之后末梢血液中虫体开始减少，可持续15～18d，甚至可持续25d虫体才消失。吉氏巴贝斯虫在 SCID鼠体内增殖机制与犬吉氏巴贝斯虫的机制相同，并且在临床上可表现出贫血、血红蛋白减少等症状，也与犬吉氏巴贝斯虫的临床症状相似。

　　(3)比较医学  置换犬红细胞的SCID小鼠体内增殖的虫体其形态可发生较大变化，虫体比犬体内寄生时明显增大，一个红细胞内时常可见到2、4、8、16及32个虫体，而且这种增殖型虫体出现比例比在犬体内大幅度增多。SCID小鼠末梢血液中生长、增殖的吉氏巴贝斯虫虫体均寄生在置换了犬的红细胞内。发生了形态变化后的吉氏巴贝斯虫回归给犬，虫体形态、大小可恢复到原状，而且仍保持着对犬具有较强的感染力。此造模动物可用于吉氏巴贝斯虫的形态、生理、生化、增殖等生物学特性研究，也可用于致病机制、治疗药物筛选等方面研究。