动物造模,药效评价,生殖器疱疹 z-bio 2024-07-24 108

　　生殖器疱疹是由人类单纯疱疹病毒(HSV)引起的性传播疾病，90％的病原体是HSV-2。在动物阴道内注射HSV-2病毒液是建立生殖器疱疹动物模型的常用方法，雌性豚鼠的生殖器疱疹模型被认为是研究疱疹病毒潜伏感染和抗病毒新药及疫苗的一个最佳模型。同时，通过模型的建立，还可以研究疱疹病毒感染后致病机制，研究机体抗病毒的免疫机制。

　　一、生殖器疱疹动物模型的建立及研究方法

　　目前。国外报道用于药效学等方面研究的生殖器疱疹动物模型主要有小鼠、猴、豚鼠模型，小鼠虽然能发生HSV-2的生殖器感染，但很少出现肉眼可见的病变，且容易死亡；猴的阴道HSV-2感染模式与人类相似，是理想的灵长类模型，但因为费用高昂限制了它的使用；豚鼠阴道HSV-2感染不但可以出现类似人类生殖器疱疹初发和复发感染的临床表现，而且可以在神经系统建立潜伏感染，病死率低，价格低廉。因此，利用雌性豚鼠建立生殖器疱疹动物模型是目前切实可行的理想选择。

　　1.豚鼠初发生殖器疱疹模型的建立方法  先用生理盐水清洗豚鼠外阴，干棉签摩擦阴道数次，然后用梅花针轻轻叩刺豚鼠外阴，使其外阴充血和少许渗血，干净棉拭子擦净外阴。继之用1ml注射器吸取0.15ml人类单纯疱疹病毒-2Sav株病毒液，配上灌胃针头伸入豚鼠阴道内3～4cm处，将病毒液注入阴道穹隆后缓慢退出，最后用明胶海绵塞入阴道口以维持病毒液。针头上少许毒液滴在外阴，用玻棒轻轻涂抹均匀，使病毒渗入皮肤。观察皮损出现。

　　2.豚鼠HSV-2复发感染模型的建立方法  在豚鼠初发感染痊愈后20d左右，将环磷酰胺与生理盐水按50mg/ml的浓度配制成溶液，以1ml/kg的剂量给豚鼠腹腔注射，考虑环磷酰胺造模周期太长，在注射环磷酰胺第10天后，改以紫外线(波长270～320nm)照射，剂量调节在7000μW/cm2。豚鼠经麻醉后令会阴部的皮肤在紫外线中暴露10min，共5d，以诱发动物皮损出现。观察外阴变化。一般在5天后出现水疱。

　　3.症状评分方法  目前文献大多参照Kern等的方法：通过观察每只豚鼠外阴皮损病变程度，进行评分：0为无症状；0.5为仅红肿无水疱；1.5为单个小水疱(≤2mm)；2.0为单个大水疱(＞2mm)；2.5为多个小疱和(或)阴道溃疡(出血)；3.0为多个大水疱；3.5为严重外阴肿胀；4.0为多个小(大)疱融合；4.5为后肢瘫痪；5.0为外阴溃疡。

　　二、生殖器疱疹动物模型的应用研究

　　1.在抗疱疹病毒新药研究中的应用  生殖器疱疹动物模型建立的一个重要用途就是用于药效学研究。Rose等通过豚鼠模型发现，口服新合成的二肽SCV-07(γ-D-谷酰-L-左旋色氨酸)，具有潜在的抗病毒和免疫调节活性，对复发性的HSV-2感染治疗效果较好，而且晨起空腹服用效果更好，为复发性生殖器疱疹的治疗提供一个良好的选择。Kratz等研究表明，没食子酸和戊烷基没食子酸同样具有局部的抑制疱疹病毒复制的作用。国内也有学者通过豚鼠动物模型进行中药治疗复发性生殖器疱疹的作用机制的研究，结果表明，中药抗病毒胶囊在复发性生殖器疱疹动物模型体内有阻止HSV.2对神经节的感染和破坏作用。

　　2.在疱疹病毒疫苗研制中的应用  建立生殖器疱疹动物模型的另外一个重要用途是疱疹疫苗的研制。通过动物模型，尝试进行HSV疫苗的研制及效能的评价是当今的一个研究热点。目前，其中一些疫苗已经进入临床评价阶段，如亚单位疫苗、减毒活疫苗、DNA疫苗等。

　　DNA疫苗是目前研究比较深入也是最具有发展和使用前途的HSV疫苗。其中，研究最多的是HSVgD疫苗和HSV gB疫苗。Bemstein等研究发现，用阳离子脂质体.DNA复合物为佐剂的HSV-2gD2重组蛋白亚单位疫苗，与单独gD2疫苗及HSV-2gD-明矾-MPL疫苗相比，更能有效预防HSV感染、明显减少病毒在阴道内的复制，减少病毒的潜伏感染，临床发病率也明显降低。Reszka等通过豚鼠模型研究证明，一种新的重组体HSV-2dl5-29-41.1具有良好的抗疱疹病毒作用，有可能成为研制HSV-2的疫苗。而Hoshino等的研究则表明dl5-29-41L和dl5-29对豚鼠产生对HSV-2感染的免疫性都是等效的，而dl5-29对免疫功能不全的动物更加安全。尽管这些疫苗在动物实验中取得较好的结果，但却无法有效阻止病毒在人体内的再复发和感染，因此，将来通过建立更加完善的动物模型，有望研制出对人体更加有效的疫苗。

　　3.在疱疹病毒致病机制研究中的应用  建立生殖器疱疹动物模型，可以对疱疹病毒的致病机制更加深入的研究。Crostarosa等建立一种独特的恒河猴动物模型，结果表明恒河猴阴道HSV-2感染在HIV感染中具有协同作用。Zariffard等的研究也发现，小鼠阴道HSV-2感染促进了鼠HIV的感染，该研究提示这种动物模型一样可以用来研究人类HSV-2感染对促进HIV易感性的作用机制并探讨可能的防范措施。Thapa等通过小鼠模型显示CXCL9或 CXCL10在HSV-2感染后对于宿主动员NK细胞、CD8+T细胞等效应细胞到感染部位具有关键作用。Gill等通过小鼠HSV-2感染模型实验，结果显示IL-15具有固有的抗病毒感染免疫作用，一旦IL-15缺乏，就会导致机体的适应性免疫反应不能对HSV-2感染提供防御作用。Wilson等研究表明小鼠阴道上皮细胞的破损或不完整会增加HSV-2的感染概率，也增加了HIV感染的风险。Pennock等研究显示雌二醇能增强小鼠生殖器疱疹疫苗的效能，这为其他疫苗的研制提供了一个思路，但也提示是否疫苗效能在不同性别上存在着差异。有趣的是，Pennock等研究还发现药物亚甲二氧基甲基苯丙胺(摇头丸)能增加小鼠对生殖器疱疹的易感性，人体内尚未见类似研究报道。

　　综上所述，通过建立HSV-2感染的动物模型，对于进一步研究生殖器疱疹的发病机制，对于疱疹病毒的疫苗研制和新药的研发均具有重要意义，尽管在研究中存在一定限制，如疫苗对于不同性别的效用和影响，新药在人体能否表现出如同动物模型中的效果，都有待于进一步研究和探索，相信随着将来实验技术的不断进步，动物模型的建立能发挥更大的作用，能更好地为人类服务。