动物造模,药效评价,胰十二指肠移植 z-bio 2024-07-01 131

　　1.造模材料  动物：封闭群小型猪，体重15.5～43.0kg，猪龄2～3个月，供受体体重相近、雌雄不限，术前禁食24、6h禁水，随机分为供、受体两组。

　　2.造模方法  用氯胺酮、依托咪酯等进行全身麻醉，行气管插管，并于颈动脉、颈外静脉置管监测平均动脉压、中心静脉压等。腹部“大十字”切口开腹，分离出肠系膜上动、静脉，阻断胰十二指肠周围血管后，经肠系膜上静脉向门静脉内插管作为流出道，经腹主动脉插管用4℃改良HAES-sterial液进行灌注，灌注压力为7.84～9.81kPa。将带有门静脉、肠系膜上动静脉、腹主动脉段的胰十二指肠、脾脏整块切取，放入4℃冷保存液内。于4℃保存液中修剪门静脉残端，在灌注状态下检查、结扎胰腺周围渗漏小血管。于腹腔干及肠系膜上动脉开口两端切断腹主动脉，近端结扎。缝合关闭十二指肠球部断端，保留带有胆胰管的6～8cm肠段，肠腔用0.5％甲硝唑液冲洗干净后缝合关闭。受体移植前准备工作与供体手术同步进行(两组人员)。取左腹股沟上方2cm处与腹股沟平行的切口，长约15cm，依次切开，于腹膜外分离出髂总动静脉，进行全身肝素化。将移植物的门静脉、腹主动脉远断端分别与受体髂总静脉、髂总动脉行端侧吻合，恢复胰腺十二指肠血供后切除脾脏。剪开腹膜约3cm，拖出部分空肠壁，与供体十二指肠进行侧侧吻合(吻合置于腹膜外)，逐层关腹。

　　术后每天输液1500～2000ml，低分子右旋醣酐500ml，常规用抗生素，并给予肝素1mg/kg，3天后逐渐恢复饮食。术后1～7d每天经彩色多普勒超声检查移植胰腺形态及血流状况。术后1、3、5、7天行超声检查时在B超引导下用18G自动活检枪行移植胰尾部穿刺活检，行常规病理检查。

　　3.造模后一般变化  供体手术时间(124.0±13.8)min，供胰热缺血时间0min，平均冷缺血时间为(145.0±18.6)min，平均灌注液量为(1500±200)ml。受体平均手术时间(130.0±21.8)min，平均失血量(236±80)ml。20例胰腺移植手术中，2例死于持续性低血压。2例术后3天出现移植胰腺化脓、坏死，再次手术探查发现1例为出血坏死性胰腺炎，1例发生吻合血栓形成，移植胰缺血坏死。术后18例受体存活时间超过3天，其中16例受体移植胰腺功能存活时间平均达(16.5±3.8)天。

　　彩超检查结果：术后1～3天，16例移植胰腺形态正常、血流信号丰富，动脉吻合口平均血流速度约(48.0±3.5)cm/s，血管阻力指数(RI)为0.66±0.25。4天后移植胰开始出现不同程度肿大、间质水肿及胰周积液，并伴随出现移植胰血流减少，动脉吻合口血流速度增快，最快达85cm/s，RI增加至0.80以上。

　　4.造模后病理变化  术后1～3天，移植胰主要表现为腺泡轻度水肿、间质内散在淋巴细胞浸润，偶见点状坏死灶，胰岛正常。3天后，可见腺泡呈散在的空泡变性、片状坏死，胰腺间质及导管周围可见大量淋巴细胞浸润，有时可见大片的坏死出血灶，胰岛结构不同程度破坏。

　　5.注意事项  手术器械严格消毒，防止手术感染，手术创伤应尽可能小，严格无菌操作。