动物造模,动物葡萄膜视网膜炎 z-bio 2024-01-29 526

　　1．动物模型制作  短尾猴6只，体重3～4kg，雌雄不拘。

　　(1)S抗原的制备：通过从人视网膜分离出来的视网膜提取物中经3个步骤分离提纯S抗原。①半饱和硫酸铵中沉淀；②通过交联葡聚糖凝胶过滤；③羟基磷灰石色谱层析吸附纯化。

　　(2)实验性主动免疫性葡萄膜炎(EAU)的诱导：用100μg溶于完全弗氏佐剂的视网膜S抗原免疫6只短尾猴。具体如下，将可溶性S抗原0.5ml用0.5ml完全弗氏佐剂乳化，将配置好的1ml视网膜S抗原分别于肩胛间5个区域皮下注射。注射之前裂隙灯、间接检眼镜、荧光血管造影(FFA)检查均未发现炎症表现，亦未发现视网膜血管遮盖物及荧光素渗漏。眼部及血管造影检查前均行氯胺酮(15～25mg／kg)肌内注射麻醉。

　　2．观察指标及结果  眼部裂隙灯及间接检眼镜检查每周检查1次以指导血管造影检查，并且在主动免疫造模后5个月内持续进行。6只中有3只造模前预先行视网膜激光光凝。在近9个月的病程观察中，发现无论葡萄膜炎的程度轻重与否，在造模后1个月突然出现病情加重的现象，双眼并非同时发病，而是一眼在另一眼发病后1～5周发病，具体体征有视网膜血管(静脉及小静脉)遮盖物，视盘水肿，前部葡萄膜视网膜炎，视网膜下渗出，玻璃体炎，偶发前部葡萄膜炎。通常*严重症状的发生在3只未预先光凝的猴子。

　　综上所述，目前已经报道的葡萄膜炎模型均由抗原诱导而获得，称为实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis，EAU)是一种器官特异性的CD4+ T细胞介导的眼内炎性疾病，是常用的研究人类内源性葡萄膜炎尤其是后部葡萄膜炎的疾病模型。所用抗原包括超抗原(S2Ag)和感光器间受体树脂样结合蛋白(interphotoreceptor retinoid binding protein，IRBP)等，因为抗原主要来源于感光器细胞层，该细胞层自然成为EAU自身免疫反应攻击的主要对象。其炎症主要位于眼球后部，以后葡萄膜为主，除视网膜、脉络膜肉芽增生外，主要病变为视网膜血管炎和血管周围炎，严重者可发生视网膜剥脱，前房不受累或轻度受累。

　　通过近年来学者的不同研究，葡萄膜炎的动物模型也有着多样化趋势，实验动物包括兔、豚鼠(guinea pigs)、大鼠和灵长类动物，不同的动物造模成功率也各不相同，尽管鼠类EAU模型比其他啮齿类如大鼠的EAU模型更接近某些类型人类的葡萄膜炎，但仍然被视为是一种短期急性的过程，而人类葡萄膜炎多呈现为长期的过程，因而在灵长类动物建立EAU模型则更为接近人类葡萄膜炎的自然病程；读者可根据研究需要，选择适合自己课题的动物，用不同的试剂建立模型。