动物造模,非酒精性脂肪肝 z-bio 2024-01-19 598

　　方法一

　　1.造模材料  动物：雄性SD大鼠，体重(150±10)g；药物：胆固醇，猪油，2％戊巴比妥溶液。

　　2.造模方法  动物正常喂养一周后，随机分为2组。正常组普通饲料喂养；模型组喂高脂饲料，即普通饲料基础上加10％猪油、2％胆固醇。实验动物自由饮水和进食，分笼(每笼5只)饲养于(20±2)℃明暗各12h的动物实验室内。于实验后12周处死两组动物，方法为隔夜禁食，次日以2％戊巴比妥溶液1ml/kg体重腹腔内注射麻醉，从后腔静脉采血后处死，迅速取出肝脏，按常规制备血清和肝组织石蜡切片及超薄切片标本。

　　3.造模原理  长期和大量进食高脂肪、高胆固醇饮食，外源性脂肪大量增加，从小肠吸收后进入血液的乳糜微粒增加，肝脏摄取自然就增多。当肝脏合成甘油三酯的量大于肝细胞转运能力时，甘油三酯则在肝内沉积形成脂肪肝。

　　4.造模后一般变化  实验中模型组较正常组体重增长迅速，且性情较为温顺，不喜动，各组均无动物死亡发生。实验结束时模型组动物的体重较正常组超重20％以上，其体重、肝指数(肝湿重/体重×100％)比正常组显著增高。

　　5.造模后生化及病理变化  血清脂质的变化：实验结束时，模型组血总胆固醇酯(total cholesterol, TCH)、游离脂肪酸(free fatty acids, FFA)显著高于正常组，血TG与正常组相比无显著差异。

　　血清肝功能的变化：实验结束时，模型组血清转氨酶(ALT、AST)较正常组显著升高，清蛋白及清蛋白/球蛋白比值与正常组相比无显著差异。

　　肝脏病理学变化：肉眼观察正常肝脏无异常变化。模型组肝脏体积明显增大，包膜紧张，边缘圆钝，整个肝脏呈奶黄色，并见局灶性黄白色变性灶，切面油腻。光镜下，正常组大鼠肝脏无异常病变。在10周时病理学检查仅是轻度脂肪肝，而无炎症、坏死，故继续高脂饮食。至12周时，剩余的模型组所有动物均出现程度不同的弥漫性肝细胞脂肪变性，且存在小叶内炎症，部分出现汇管区炎症，还有汇管区变性及点状坏死或坏死灶，甚至部分坏死灶融合成片，肝组织炎症细胞浸润以单核细胞、淋巴细胞为主，并有一些中性粒细胞浸润，但未见肝纤维化。脂变肝细胞以中央静脉周围*为明显，极度肿胀呈圆形，体积较正常明显增加，细胞质内充满大量脂肪空泡，酷似泡沫细胞，界限不清，肝窦狭窄。模型组可见肝细胞超微结构明显异常。肝细胞索排列紊乱，细胞质脂滴大量出现且严重聚积，常成群出现，大多呈卵圆形或圆形，单个脂滴直径达6μm以上。毛细胆管排列不整齐，线粒体嵴轻度肿胀，肝星状细胞和库普弗细胞明显增生。

　　方法二

　　1.造模材料  动物：雄性Wistar大鼠，体重(200±10)g；药物：高脂饲料(配方成分：蔗糖360g，右旋麦芽糖200g，猪油250g，植物纤维素50g，玉米粉50g，食盐7.5g，黑豆30g，CaCO3 2.5g，MgO 1.5g，维生素A 15000U，维生素D 21500U，维生素E 0.5g。

　　2.造模方法  实验组用高脂饲料喂养21天，对照组用正常饲料喂养21天后行门静脉压、肝重测定以及肝脏病理检查。实验前14h禁食，可以自由饮水，戊巴比妥30mg/kg腹腔内注射麻醉。上腹正中横行切口入腹，游离肝十二指肠韧带用5'头皮针(接有脑脊液L形测压管)穿刺测门静脉压。取肝行肝重量测定后，另取部分肝，用10％甲醛固定，行常规病理切片检查。

　　3.造模原理  饲料缺乏蛋氨酸和胆碱，前者为合成载脂蛋白所需，后者缺乏引起卵磷脂合成不足，从而导致极低密度脂蛋白合成下降，无法将甘油三酯运出肝外，引起肝内脂肪堆积，形成脂肪变性。

　　4.造模后变化  实验组喂养高脂饲料10天后大鼠皮毛蓬乱而无光泽，精神萎靡，食欲缺乏，体重减轻。对照组大鼠体重呈增加趋势。

　　对照组和实验组大鼠体重、肝重及门脉压：实验组大鼠体重、肝重明显小于对照组，差异有显著性，肝重/体重比值差异无显著性。对照组门脉压为(1.01±0.09)kPa，实验组为(1.18±0.05)kPa，两组比较差异有显著性。

　　肝脏组织学：实验组：大体见肝表面有油腻感。锇酸染色光镜下第8天肝细胞内有少量脂滴，第14天约1/3肝细胞含有细颗粒状脂滴，第21天约2/3以上肝细胞内出现脂滴，第28天脂滴更大。肝窦被挤压变窄，肝细胞形态不规则。对照组肝脏未见以上改变。

　　方法三

　　1.造模材料  动物：雄性SD大鼠，体重200～220g；药物：胆固醇，脱氧胆酸钠，丙二醇、吐温80(AR级)，植物油、白砂糖、全脂奶粉、动物用复合维生素，猪油。

　　2.造模方法  正常喂养1周后的大鼠，随机分为正常组、模型组。所有动物均给以普通饲料、自由饮水；模型组每天灌胃高糖、高脂、高蛋白乳剂，乳剂组成如下：猪油15g、植物油15g、胆固醇7.5g、蔗糖15g、胆盐1g、奶粉8g、复合维生素0.5g、吐温805ml、丙二醇5ml，加蒸馏水至100ml。实验开始第1～4周乳剂剂量按2.5、5.0、7.5、10ml/kg每周递增，后2周持续10ml/kg；实验共持续6周。

　　3.造模原理  长期和大量进食高脂肪、高胆固醇饮食，外源性脂肪大量增加，从小肠吸收后进入血液的乳糜微粒增加，肝脏摄取自然就增多。当肝脏合成甘油三酯的量大于肝细胞转运能力时，甘油三酯则在肝内沉积形成脂肪肝。

　　4.造模后一般变化  模型组大鼠食量小于正常组，但体重增加情况与正常组无差异，状态较好，毛发整齐而有光泽，无腹泻及死亡现象。

　　5.造模后生化及病理变化  与正常组比较，模型组大鼠血清ALT[正常组(23.20±8.13)U/L，模型组(73.45±25.18)U/L]、AST[正常组(32.64±9.61)U/L，模型组(73.59±23.42)U/L]增高。与正常组相比，模型组大鼠血清TC及肝匀浆TC、TG含量增高，血清TG含量无变化。

　　正常组大鼠肝脏无异常；模型组大鼠肝脏包膜紧张，边缘圆钝，肝脏呈奶黄色，切面油腻。光镜下，正常组大鼠肝细胞索排列正常，核圆、大、居中，无炎症细胞浸润；模型组大鼠出现弥漫性脂肪变性，以中央静脉周围*为明显，肝细胞体积增大，胞质内见大小不等的圆形空泡，核居边，部分肝小叶内见点状坏死灶，局部见个别碎片状坏死灶及炎细胞浸润，但未见肝纤维化。

　　方法四

　　1.造模材料  动物：雄性SD大鼠，体重(150±10)g；药物：胆固醇，蛋黄粉，猪油。

　　2.造模方法  雄性SD大鼠，正常适应性喂养1周后，随机分为2组。正常组普通饲料喂养；模型组喂高脂饲料，即普通饲料基础上加10％猪油，2％胆固醇，5％蛋黄粉。实验动物自由饮水和进食，分笼(每笼5只)饲养于(20±2)℃明暗各12h的动物实验室内，饲养12周。

　　3.造模原理  长期和大量进食高脂肪、高胆固醇饮食，外源性脂肪大量增加，从小肠吸收后进入血液的乳糜微粒增加，肝脏摄取自然就增多。当肝脏合成甘油三酯的量大于肝细胞转运能力时，甘油三酯则在肝内沉积形成脂肪肝。

　　4.造模后一般变化  实验中模型组较正常体重增长迅速，且性情较为温顺，不喜动，各组均无动物死亡发生。实验结束时模型组动物的体重较正常组超重11％以上。体重、肝体比(肝重/体重)比正常组增高。

　　5.造模后生化及病理变化  实验结束时，模型组血TG高于正常组。模型组TNF-α高于正常组。

　　肉眼观察：正常肝脏无异常变化。模型组肝脏体积明显增大，包膜紧张，边缘圆钝，部分肝脏呈奶黄色，切面油腻。

　　光镜结果：光镜下，正常组大鼠肝脏基本无异常病变，模型组所有大鼠均出现不同程度的弥漫性肝细胞脂肪变性，且90％存在小叶内炎症，80％出现汇管区炎症，还有汇管区变性及少量点状坏死。肝组织炎症细胞浸润以单核细胞、淋巴细胞为主，并有一些中性粒细胞浸润。脂变肝细胞呈圆形，极度肿胀，体积较正常明显增加，细胞质内充满大圆脂肪空泡，界限不清，肝窦狭窄。

　　超微结构：模型组可见肝细胞超微结构明显异常。肝细胞索排列紊乱，细胞质脂滴大量出现且严重聚积，常成群出现，大多呈卵圆形或圆形，单个脂滴直径达6μm以上。毛细胆管排列不整齐，线粒体嵴轻度肿胀，肝星状细胞和库普弗细胞明显增生，细胞核不规则，部分呈现核固缩。