动物造模,伤性癫痫动物模型,药效评价 z-bio 2024-09-05 851

　　1.造模材料  动物：健康成年雄性SD大鼠，体重180～220g；药物：10％水合氯醛，FeCl2溶液。

　　2.造模方法  大鼠以10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉。固定于立体定向架上。手术暴露颅骨，根据注射部位确定钻颅部位。钻开颅骨，根据包新民等(1991年)大鼠脑立体定位图谱，微量进样器缓慢进针至靶点(大鼠右额叶皮质坐标为：前囟前2.0mm，中线旁3.0mm，硬膜下2.0mm)。于右额及右枕各钻一孔安装不锈钢电极，固定。参考电极放置右耳。连接于POWERLAB生理记录仪。开始记录脑电图，10min后用自动推进器向靶点缓慢注射FeCl2(0.1mol/L)1000nmol，速率1μl/min，注射后留针5min。假手术对照组在同一部位注入等量的生理盐水。

　　3.造模原理  铁具有致痫作用。

　　4.造模后的变化  注射FeCl2成功致痫后表现为：大鼠出现凝视、不动，呈阵发性，此后开始表现为湿犬样运动。或出现自动症。如重复、刻板地点头、咀嚼、哈欠、喷嚏等，伴有面部抽动，以及轻度惊厥，出现一侧前肢震颤：站立、双前肢震颤及持续性点头；双前肢震颤加重。失去平衡跌倒而出现全身性强直一阵挛性发作；严重者发作衰竭导致死亡。

　　模型组的病程明显地分为急性期、静止期和慢性期。7天内，尤其3天内发作频繁，此后发作减少，15天后出现较规律的发作，以局灶性发作多见。

　　正常大鼠的EEG频率以5～10Hz为主，波幅小于200V。以低幅β、α为主，散在θ波。生理盐水注射后，脑电波形无明显变化。模型组注射皮层后平均经过(60+18)s的潜伏期，大鼠EEG表现出多种形式的癫痫样放电波形。典型波形有单棘波、多棘波、多相棘波、双相棘波、正相棘波、棘节律、慢波、棘慢波、慢波叠加棘节律、尖波、发作性节律波、发作后抑制等。频率*快可达30Hz。波幅高达310V，发作后可出现抑制波。

　　5.造模后病理变化  模型组大体外观见右额叶萎缩。明显棕黄色，为含铁血黄素沉着，而对照组相应部位未见明显改变。光镜下观察：模型组注射部位明显神经元变性、死亡，细胞结构瓦解、紊乱。实验侧海马神经元缺失明显，CA3区*明显，实验侧海马 CA3、CA4区神经元缺失，细胞核固缩，浓染，出现嗜酸性神经元，细胞排列紊乱；胶质细胞增生。对照侧轻；CA1和CA2病变轻。模型组可见大脑皮质和海马CA1、CA3区细胞密度明显低于对照组。模型组注射灶及其周围有大量呈Perls阳性的吞噬细胞浸润，吞噬细胞几乎占据整个病灶，巨噬细胞深染居外周，光镜下细胞质内颗粒粗大，大量堆积，分辨不清细胞质与胞核，小吞噬细胞和少量巨噬细胞位于病灶中央，也染成深蓝色。病灶周围的胶质细胞反应也增强，胞体长形或似蝌蚪形，均有长短不一的突起，细胞数量较多，均染成深蓝色，细胞质与突起着色，核不着色。对照组前额皮质Peds阴性反应，或仅在病灶内有稀疏的巨噬细胞深染，损伤侧病灶旁有散在的小胶质细胞是Perls阳性，其他区域接近正常。

　　6.注意事项  手术器械严格消毒，防止手术感染，手术创伤应尽可能小，严格无菌操作；颅骨钻孔时应注意深浅，一旦有突破感立即停止，防止引起大量出血。

　　术后大鼠应分开，等苏醒后3～5h才能合笼饲养，防止先醒的舔咬昏迷大鼠的伤口。饲养室内尽可能保持大鼠*适温度、湿度。