动物造模,心气虚细胞模型 z-bio 2023-10-16 682

　　(1)复制方法  心肌细胞培养选用出生后2～4d的 NIH小鼠乳鼠，取乳鼠心脏，置于Hank液中洗涤后，剪去心房，再反复冲洗，洗净残留积血，将乳鼠心室置于离心管的侧壁上，每个心室用纵横各剪2刀后，加入0.1％胰蛋白酶10ml，37℃水浴中振动消化10min，自然沉淀后弃去上清液，再加入胰蛋白酶10ml，又置37℃水浴中振动消化10min，吸管吹打组织1min后，让其自然沉淀，将上清液移至另一无菌离心管中，加入2ml培养基终止消化，沉淀物继续按前法加胰蛋白酶进行消化，并按前法收集上清液，如此重复6次，上清液用离心机500r/min连续离心5min，弃上清液后，再加培养基重复离心1次。将细胞悬液置于培养瓶中于37℃恒温培养箱中静置1.5h后，吸出细胞悬液，计数后，接种于24孔培养板上，每孔接种心肌细胞2.5×100000个，每孔加培养液(每100ml含1640培养基80ml、小牛血清20ml)至1ml培养板，4周用透明胶密封后置于37℃恒温培养箱中培养，2d后换培养基1次。取培养3d后的心肌细胞单层进行试验，将培养板置于一容器中，用99.99％高纯度氮气向容器中充气1min后密闭容器口，缺氧1、2、3h打开容器口，向内充入氧气(95％O2，5％CO2)1min，37℃静置30min后收集细胞上清液进行生化检测，包括乳酸脱氢酶(LDH)，肌酸激酶(CK)，丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)等。

　　(2)模型特点  缺氧1、2、3h培养心肌细胞上清液中 LDH、CK、MDA大量增加，SOD活性降低，缺氧时间为3h者变化*明显。

　　(3)比较医学  心气虚证患者常具有心悸、气促，动则尤甚等心功能不全的临床表现，而心肌的缺血常可导致心功能的损害从而使患者出现类似心气虚证的心悸、气促，动则尤甚等症状的出现。心肌缺血造成心功能的损害*终是由于缺血导致心肌缺氧所致。从理论上分析，心肌缺血缺氧导致心功能的损害应视为产生心气虚证的重要原因。以缺氧作为心气虚证的模拟病因，采用培养心肌细胞缺氧再给氧损伤方法建立心气虚细胞模型，在心气虚证造模的方式上作了一新的探索。笔者认为。心气虚细胞模型这种提法值得商榷，根据中医证候的概念，我们只能说心气虚证在细胞层次上的表现出来的相应变化，故确定为心气虚细胞模型似乎不妥。