动物造模,局灶性脑缺血模型 z-bio 2023-10-11 702

　　1.造模材料  动物：健康SD成年大鼠，体重250～300g，雌雄不限；药品：水合氯醛。

　　2.造模方法  制备前准备：①栓线的制作：采用Longa线栓法将直径0.2mm的尼龙线展开，线的一端靠近酒精灯的火焰上快速烧灼，使线段一端熔化成一个膨大的球状，在显微镜下将尼龙线剪成约20mm的小线段备用；②实验器材的准备：调试好手术显微镜、显微器械，将1-0手术丝线剪成2段10cm长的线段备用。

　　麻醉：10％水合氯醛按0.35ml/100g体重的剂量腹腔注射麻醉，注射器针头从腹部向头方向缓慢刺入腹腔，为避免误刺入肠管内，推药前回抽针芯，阻力较大，无回血，无胃肠道内容物，证明注射器针头在腹腔里，缓慢推注麻醉药剂。麻醉后约10min大鼠逐渐瘫软，反应淡漠，用手牵拉大鼠尾部无明显反抗时将大鼠固定，主要固定大鼠上颌的两个中切齿和双侧上下肢。实验过程中，用红外线烤灯照射维持大鼠肛温在37℃左右，直到恢复活动。室温保持在20℃以上。

　　备皮刀刮大鼠颈前区毛发，碘酒酒精消毒皮肤，置于手术显微镜下进行操作。取颈部正中切口，上自颈部与下颌反折处，下方到达胸骨角。剪开阔筋膜，显露左侧胸锁乳突肌，从胸锁乳突肌和颈前部肌群之间向深部分离，用血管钳将皮肤及皮下组织向外侧牵开，用显微镊子从颈动脉搏动处牵开薄层肌肉组织，撕开薄层结缔组织，即达到颈总动脉，沿此间隙继续向上分离，找到颈总动脉分叉。从左侧颈总动脉下方穿过一段1-0手术丝线牵引线，左侧颈内动脉下方也穿过一段牵引线，用血管钳提起，拉向大鼠左侧，压闭颈总动脉以及颈内动脉以控制剪开动脉时的出血。用3-0手术丝线结扎颈外动脉远端及枕动脉，在结扎线离分叉部2mm处剪断颈外动脉，将一端已加工成光滑球形的尼龙线从颈外动脉残端插入进行结扎，将尼龙线经颈总动脉分叉部插入颈内动脉，此时松开颈总、颈内动脉套线恢复血流，线栓推送顺滑，无出血。将线栓向上深入至分叉以上18～19mm时，轻推尼龙线感觉有阻力，此时已达到大脑中动脉开口处，阻断了大脑中动脉血流。若栓线插入深度至10～13mm即感到有明显阻力，说明栓线没有通过颈内动脉进入颅内，而是误入了翼腭动脉，需要退回栓线，将线栓变换到颈内动脉方向重新插入。

　　3.造模原理  将尼龙线头端烧成鼓槌状从颈外动脉或颈总动脉分叉处插入，经颈内动脉达到大脑中动脉开口处阻断血液循环，导致大脑中动脉供血区域脑组织局灶缺血。

　　4.造模后的变化  线栓法栓塞后，大鼠一般2h左右清醒，醒后观察大鼠出现行动迟缓、站立不稳。24h后栓塞大鼠均出现同侧Homer征、自发瘫痪侧旋转、提起尾巴对侧前肢无力屈曲、反抗力减弱等神经废损体征。

　　大鼠线栓24h后处死，手术显微镜下掀开大鼠颅骨探查见缺血脑组织呈灰白色，颅底见栓线头端恰好位于大脑中动脉开口处。脑组织切片用1％氯化四唑(tetrazolium chlo-ride, TTC)/磷酸缓冲液染色观察，可以看到大鼠大脑左侧额顶皮质以及基底节区大范围的梗死区，呈现白色，而正常血流供应区域呈现红色，界限分明，容易辨认。

　　5.注意事项  操作中动作要轻柔，线栓进入颅内时，避免强行推送，以免损伤血管甚至穿破血管导致蛛网膜下腔出血而死亡。