动物造模,仓鼠莱姆病感染 z-bio 2023-09-26 562

　　1.造模方法 伯氏疏螺旋体从感染病人的脑脊液中提取出来，此螺旋体培养在含BSK的培养基中，温度为保持在35℃，生长周期为5d。加入新鲜的BSK使得悬液中螺旋体的含量保持在5×1000 000/ml。选取叙利亚仓鼠进行造模实验，体重为80～100g，把含有5×1000 000/ml的伯氏疏螺旋体悬浮液10000转/分，去除上层杂质。可以采用静脉注射或注入后脚掌皮下的方法造模，注入的量为0.2～0.4ml上述螺旋体悬液。14d后，可以在6个器官中检测到螺旋体的存在。感染3周后，动物模型出现后爪部的肿胀、跛行现象，随着病程进展加重出现严重的关节炎症状。

　　2.模型检测方法

　　(1)血清学检测：采用酶联免疫吸附试剂检测仓鼠感染模型中抗伯氏疏螺旋体抗体的效价。从仓鼠体内提取的血清要1：20稀释，采用兔抗仓鼠的免疫球蛋白G的抗体来检测。简单的说，将孔板中加入含有伯氏疏螺旋体的血清100μl孵育15min。孵育后，用碱性磷酸酶冲洗，加入稀释的兔抗仓鼠的免疫球蛋白G。感染螺旋体3周的模型开始出现血液中抗体滴度的增加，到5周时抗体效价达到高峰。

　　(2)组织病理学检测：把感染1周或3周的模型采用吸入二氧化碳的方式使其安乐死，取心肌、肾、脑组织、皮肤、关节、肌组织等放入含有10％的福尔马林溶液中固定，脱水、石蜡包埋、切片、苏木素伊红染色，用暗视野显微镜法检测查伯氏疏螺旋体。显微镜下见，感染后模型动物心脏、关节等组织周围出现中性粒细胞、单核细胞等炎症细胞浸润现象。关节滑膜增厚。

　　(3)病原分离培养：取感染后3周的仓鼠模型注射部位皮肤组织小块、脑脊液及内脏组织等接种于BSKⅡ培养基，温度保持在33℃。5～7d后暗视野显微镜下检查，发现阳性培养物，传代后以便进一步鉴定证实。

　　(4)PCR方法检测：感染3周后从动物注射部位取皮肤组织或取非注射部位组织，处理后用PCR方法检测伯氏螺旋体DNA是否存在。

　　3.模型特点  仓鼠对肩突硬蜱的感染率可达55％～75％，动物感染莱姆病后可易出现后胫、趾关节滑膜肥大，并伴有局部溃疡和覆盖黏着性纤维蛋白。镜下可见关节滑膜、肌腱组织中易出现大量中性粒细胞、淋巴细胞和微血管扩张等。仓鼠莱姆病感染模型多应用于莱姆病的实验传播研究、媒介效能和宿主潜能的分析研究。