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【动物造模】-两株CRISPR工程大肠埃希菌在小鼠体内的定植实验研究

  目的 利用小鼠对2株大肠埃希菌工程菌Nissle1917和BW25113在肠道的定植能力与定植效率进行评价, 以筛选出肠道定植效率高的菌株,为后续利用成簇的规律性间隔的短回文重复序列及其相关蛋白系统的工程 菌消减体内耐药菌的研究奠定基础。

  方法 每株工程菌的实验共取70只18~20 g的ICR小鼠,雌雄各半,操作时小 鼠区分性别并随机分为7个处理组,每组10只 (6只实验,4只对照)。实验组灌胃2×1010个工程菌共200 µL,对照 组灌胃等体积的PBS。灌胃后1、3、6、12、24、48、72 h分别取小鼠的肠系膜淋巴结、胃、回盲部、结肠组织及 内容物,分别采用平板划线、荧光镜检和PCR法检测工程菌,比较Nissle1917和BW25113这2菌株在小鼠体内的定 植能力与效率。

  结果 灌胃后前6个时段 (1、3、6、12、24、48 h) 中,3种方法检测到2株菌在胃、回盲部、结 肠组织有定植,淋巴结未检到目标菌株;而72 h有且仅有Nissle1917 菌定植于回盲部和结肠组织,Nissle1917 和 BW25113两株菌的定植效率分别为100%和0。

  结论 Nissle1917菌定植效率高于BW25113菌,且能较长时间定植于 回盲部和结肠组织,提示其可作为防控耐药基因传播用CRISPR系统的备选载体菌。

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