动物造模,脑外伤 中国实验动物信息网 2022-12-12 491

　　目的 探究 2,4-二胺-6-羟基嘧啶(DAHP)对脑外伤大鼠的神经保护作用,初步探究其可能的作用机制。

　　方法 采用 Feeney 法制备脑外伤大鼠模型,将造模成功的 SD 大鼠随机分为模型组、DAHP 组、NOS 激活剂组(四氢生物蝶呤(BH4)组))、DAHP+BH4 组,每组 12 只,另选取 12 只大鼠仅打开骨窗不采取打击器打击作为假手术组。 造模后 2 h,DAHP 组尾静脉注射 0. 5 g / kg 的 DAHP,BH4 组尾静脉注射 0. 3 mg / kg 的 BH4,DAHP+BH4 组 尾静脉注射 0. 5 g / kg 的 DAHP 与 0. 3 mg / kg 的 BH4,假手术组、模型组均注射等量生理盐水,注射体积均为 10 mL/ kg,每天给药 1 次,连续处理 1 周。 末次处理后,采用定位航行、空间探索实验评估大鼠行为学;苏木素-伊红(HE) 染色观察大鼠脑组织形态学变化;Tunel 染色观察脑组织细胞凋亡;Griess 法检测脑组织一氧化氮(NO)水平;免疫印迹法检测大鼠脑组织中神经型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶-2(COX-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B 淋巴细胞瘤-2 基因(Bcl-2)蛋白表达情况。

　　结果 假手术组脑组织神经细胞形态正常,细胞核着色均匀;模型组神经细胞发生肿胀、变形、细胞 核固缩,伴有炎性细胞浸润;与模型组相比,DAHP 组神经细胞组织形态得到一定缓解,炎性浸润程度减轻,BH4 组坏死神经细胞数量增多,损伤程度加重,DAHP+BH4 组细胞形态变化不显著。 与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长,空间探索时间比例、脑组织 Bcl-2 蛋白降低,脑组织细胞凋亡率、nNOS、iNOS 蛋白表达、NO 水平、NF-κB、 TNF-α、COX-2、Caspase-3 蛋白表达升高(P<0. 05)。 与模型组相比,DAHP 组大鼠逃避潜伏期缩短,空间探索时间比例、脑组织 Bcl-2 蛋白升高,脑组织细胞凋亡率、nNOS、iNOS 蛋白表达、NO 水平、NF-κB、TNF-α、COX-2、Caspase-3 蛋白表达降低(P<0. 05)。 与模型组相比,BH4 组大鼠逃避潜伏期延长,空间探索时间比例、脑组织 Bcl-2 蛋白降低,脑组织细胞凋亡率、nNOS、iNOS 蛋白表达、NO 水平、NF-κB、TNF-α、COX-2、Caspase-3 蛋白表达升高(P<0. 05)。 DAHP+BH4 组大鼠逃避潜伏期、脑组织细胞凋亡率、 nNOS、 iNOS 蛋白表达、NO 水平、NF-κB、 TNF-α、COX-2、 Caspase-3 蛋白表达低于 BH4 组,空间探索时间比例、脑组织 Bcl-2 蛋白表达高于 BH4 组(P<0. 05)。

　　结论 DAHP可缓解脑外伤大鼠神经功能损伤,减轻脑组织神经细胞凋亡,其机制可能与抑制 iNOS 信号通路有关。