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【动物造模】-兔斯氏艾美耳球虫感染模型及巢式PCR诊断方法的建立

  目的 建立兔斯氏艾美耳球虫感染模型和巢式PCR诊断方法。

  方法 利用剖检、显微镜观察、血液生化和病理组织学检查等方法对建立的兔E.stiedai模型进行鉴定。通过收集卵囊,提取E.stiedai 的 DNA,设计特异性引物,建立 E.stiedai 巢式 PCR检测方法。

  结果 临床剖检∶兔腹围明显增大,解剖见肝脏肿大,肝脏表面和实质布满白色及淡黄色结节,胆囊和胆管肿大,胆汁呈淡黄色。显微镜观察∶ 虫卵大小为(31 72~ 38.43)μm×(18.10~22.69)μum。血液生化检查∶球蛋白(GLOB)指标偏高,肌酐(CREA)和a磁性酸断(ALKP)指标偏低氏。其余检测指标均在参老值范围内。病理组织学检查:肝组织和

  胆管中见大量粉红色E.stiedai虫卵。巢式PCR检查∶ *低检测限为1 个卵囊DNA样本和1.14 x 103拷贝数质粒,阴性对照和空白对照均未出现条带,重复性实验变异性系数< 5%。

  结论 成功构建兔E.stiedai 感染模型,建立的巢式 PCR诊断方法可扩增出E.stiedai 的特异片段,敏感性强,重复性好。

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