动物造模,转基因小鼠模型 中国实验动物信息网 2022-10-20 663

　　目的    期望获得含有全长hACE2基因序列的hACE2人源化小鼠模型,为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、药物与疫苗研发提供重要工具。

　　方法    将纯化含有hACE2完整编码序列的BAC质粒,利用小鼠受精卵显微注射和输卵管移植技术获得多个首建鼠,分别育种建系,通过杂交育种获得稳定遗传 F2 代小鼠品系,进一 步对 F2 代小鼠 hACE2 基因整合、基因拷贝数、相对荧光定量 PCR、Western Blot 和免疫荧光进行分析。

　　结果    育种获得 hACE2-6-9、hACE2-14-3、hACE2-15-1 和 hACE2-15-2 共 4 个小鼠品系。 基因整合结果显示,hACE2-6-9、hACE2- 15-1 和 hACE2-15-2 小鼠品系含有完整的 hACE2 基因座位点及较长的基因调控区,hACE2-14-3 含有完整的 hACE2 基因座位点及 3’UTR 较短的基因调控区。 相对荧光定量 PCR 和 Western Blot 检测结果显示,hACE2-6-9、hACE2- 15-1 和 hACE2-15-2 品系小鼠肠道中 hACE2 mRNA 和蛋白表达水平较低,而整合较短调控序列的 hACE2-14-3 小鼠品系则表达水平较高。 免疫荧光染色结果显示 hACE2-15-1 品系小鼠肾小管和肺血管内皮细胞中均有 hACE2 表达。

　　结论    获得了含有全长基因序列的hACE2人源化BAC转基因小鼠,保留完整的 hACE2 启动子及基因调控区,从而为心血管疾病、新冠肺炎发病机制研究、hACE2 基因表达调控机制研究和药物、疫苗的研发提供重要工具。