动物造模 中国实验动物信息网 2024-01-23 739

　　目的 探究雌激素缺乏对终板软骨细胞退变的影响。

　　方法 选取 6 月龄大鼠 40 只,分为两组:双侧卵巢切除实验组(OVX)和假手术对照组(SHAM)。 术后 9 周取材,分别进行软骨终板组织的提取和原代终板软骨细胞的培养。 免疫组化实验对比 SHAM 组和 OVX 组的软骨终板组织 II 型胶原(COL-II)的表达情况。 倒置相差显微镜和甲苯胺蓝细胞染色观察细胞形态来鉴定终板软骨细胞。 CCK-8 法对比两组终板软骨细胞的活力情况。 罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色观察 OVX 后终板软骨细胞 F-actin 的改变情况。 细胞免疫荧光检测终板软骨细胞在雌激素缺乏后 COL-II 的改变情况。 RT-qPCR 法对比两组的 SOX9、ACAN、ADAMTS-5、MMP13 和 COL-X 的表达有无差异。

　　结果 与对照组相比较,OVX 组的软骨终板的 COL-II 蛋白表达减低。 终板软骨细胞的形态大多呈多角形和梭形,铺路石样排列。 OVX 的终板软骨细胞活力降低,细胞骨架更加紊乱,应力纤维增多,迁移能力下降, COL-II 表达降低。 与对照组相比,OVX 组的终板软骨细胞 SOX9 和 ACAN 表达降低,MMP13、ADAMTS-5 和 COL-X 表达升高。

　　结论 雌激素缺乏会使终板软骨细胞发生退变。 OVX 后的终板软骨细胞活力下降、迁移能力降低、骨合成减低伴随细胞外基质的降解和细胞肥大分化增加。