动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2022-07-26 497

　　目的：建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。

　　方法：PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的qPCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。

　　结果：所建立的qPCR检测方法,质粒DNA浓度在108~101拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR(7.8%)的检出率高。

　　结论：建立的H.bilis qPCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。