多能干细胞,非转基因iPS细胞 中国实验动物信息网 2020-08-18 749

　　多能干细胞（Ps）目前在干细胞研究中引起关注，它可以分化为人体的所有细胞，并形成人体的所有组织和器官。因此，多能干细胞的研究不仅在理论上具有重要意义，而且在器官再生，修复和疾病治疗中具有重要的应用价值。但是，以前认为多能干细胞只能从人胚胎中获得。在2007年，美国和日本科学家引入了四个基因，即KLF4、OCT4、SOX2和C-MYC，以增加正常人和小鼠皮肤细胞的正常体细胞数量..我们发现它可以转化为感受态干细胞。由该基因诱导的多能干细胞被称为诱导多能干细胞（iPSC）。毫无疑问，这种类型的ips细胞在再生医学领域具有重要的应用价值，但是传统的诱导方法是通过逆转录病毒或慢病毒载体携带OKSM的四个要素。 ..人类细胞治疗领域为了解决这个问题，在过去的几年中，科学家们开发了多种方法来诱导无外源因子的iPS细胞产生。这些方法包括质粒，piggyBac转座子，蛋白质转导，mRNA和micrornA转染。尽管这些方法可以产生没有外源因素的iPS细胞，但它们不能提供稳定，可靠和高质量的可复制嵌合细胞。

　　在这项研究中，中国农业大学和犹他大学的研究人员将8个重编程因子和一个选择标记基因引入到非整合质粒中，以产生高质量的非转基因（包括转基因）。 ）已生成。 iPS单元。该方法在干细胞研究领域具有重要的应用。所谓的无转基因的iPS细胞是无需外部重编程因子即可获得或维持多能性的iPS细胞。为了获得这种iPS细胞，质粒要求高于常规的经典四因子重编程方法。此方法中包括的八个重编程元素是OCT4、SOX2、KLF4、MYC，NANOG，LIN28，NR5A2、MIR302/367。正选择标记基因是neo，负选择标记基因是tk。重新编程完成后，未掺入的质粒可用于通过负选择轻松去除质粒。 “中国农业大学的吴森教授解释说，研究人员优化了重编程因子的组合，选择了合适的选择标记，并将二者整合到非整合质粒中。更重要的是，pMaster12该质粒产生不含转基因的iPS细胞，这意味着它们可以在2i培养基中生长细胞以产生胚胎并产生健康的后代。主要原因是先前获得的iPS单元的质量不够好。他介绍了与其他方法的区别以及新方法“当使用更多的重新编程元素时两者之间的主要区别是。” ，然后在向量中放置8个重编程元素。这样的一个优点是更高的重编程效率，另一个优点是在重编程完成后容易去除外源质粒（因子）。

　　这项研究对于解决iPS细胞的致癌性问题非常重要，对于分析诱导的多能干细胞的分子机制也很有用。使用相同的方法了解他们正在尝试使用的从大型动物（例如猪和绵羊）。