动物造模 中国实验动物信息网 2022-06-07 871

　　目的： 区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体，对APP基因特征进行描述，并确定其在各组织中的表达分布。

　　方法： 参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列，设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中提取总RNA，反转录为cDNA，利用高保真酶扩增目的剪切体DNA。根据PCR扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别，*后将PCR产物胶回收进行测序鉴定，对获得的基因进行特征描述，并结合定量PCR的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。

　　结果： 结果表明树鼩APP剪接体的全长为3514 bp，有一个109 bp的5'-UTR，1092bp的3'-UTP。APP基因在调查的9个物种中高度同源保守，显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。通过三维建模获得了树鼩和人的APP基因共同拥有的4个结构域。同时确认这4种通过外显子跳跃产生的APP可变剪接体在不同组织中的分布和表达。4种检测到的剪接体APP770，APP695，APP751，APP677均表达于肺、肾和肠，表达量*高的是肺、肌肉和睾丸。

　　结论： 对树鼩APP基因可变剪接体的表达研究，有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。