动物造模 中国实验动物信息网 2023-07-24 683

　　目的：狨猴血清中纯化 ＩｇＧ 抗体，制备兔抗狨猴抗血清，并纯化抗血清中 ＩｇＧ，ＨＲＰ（辣根过氧化物 酶）标记兔抗狨猴 ＩｇＧ。

　　方法: ＨｉＴｒａｐ ＴＭ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ 亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清 ＩｇＧ，十二烷基硫酸钠聚丙烯 酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ）进行纯度鉴定，免疫琼脂双扩散法（ ｄｏｕｂｌｅ ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）测定制备的兔抗狨猴 抗血清效价，改良“简易过碘酸钠标记法”制备兔抗狨猴 ＩｇＧ⁃ＨＲＰ 标记抗体，酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）及蛋白 免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）对兔抗狨猴 ＩｇＧ⁃ＨＲＰ 标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。

　　结果:狨猴和兔抗 狨猴血清纯化 ＩｇＧ 纯度分别大于 ９５％ 、９７％ ；兔抗狨猴 ＩｇＧ 抗血清的效价为 １∶ ６４。 ＥＬＩＳＡ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 鉴定了 兔抗狨猴 ＩｇＧ⁃ＨＲＰ 酶标抗体参考工作浓度为 １∶ ２５６ ０００、１∶ １５ ０００，特异性明显。

　　结论:制备狨猴 ＩｇＧ⁃ＨＲＰ 标记抗 体并初步鉴定，包括 ＥＬＩＳＡ 及 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 的特异性及使用浓度，为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学 检测体系储备了资源。