动物造模 中国实验动物信息网 2022-05-11 1227

　　目的：人的ABO血型常规免疫学检测方法不适用于实验猴猕猴血型检测,而实验猴血型鉴定在器 官移植等研究中必不可少｡ 本研究目的是建立一个快速､可靠的恒河猴与食蟹猴ABO血型核酸鉴定方法｡

　　方法: 本室建立了一种新的ABO血型的分子学检测方法,利用竞争性等位基因PCR(KASP)技术,通过识别与血型密切 相关功能基因的2个SNP位点上的碱基,对恒河猴与食蟹猴血型进行分型,并通过设计2个SNP位点外围的普通 PCR引物,对KASP方法鉴定出的血型样本进行Sanger测序鉴定｡

　　结果：比对了15份用TaqmanPCR方法已确定 血型的食蟹猴全血核酸样本,新建立的KASP分型结果与原血型结果完全一致,为了保证KASP方法鉴定结果的准 确性,实验人员用新建立的普通PCR方法通过Sanger测序验证了KASP方法与测序结果完全一致｡ 为了对新建的 KASP方法重复性进行验证,选取了已知血型的6份实验猴全血,每份血样做5个重复,结果显示该方法有极好的 重复性｡ 进一步用新建的KASP方法检测了51份临床样本,其中食蟹猴样本38份,恒河猴样本13份,同一样本的 2个位点的血型结果完全一致,其中A型血9份(17.6%),B型血19份(37.3%),AB型血23份(45.1%),未检出 O型血｡ 同时从A型､B型､AB型的临床样本中,各型分别选了5个样本,进行普通PCR扩增及测序分析,证明2 个SNP位点上的序列与KASP分型结果一致｡

　　结论：新建的KASP血型鉴定方法准确性高,可用于实验恒河猴与 食蟹猴的ABO血型的快速检测｡ 该方法相较于传统的血清学或测序方法,简单快捷,经济可靠,结果易于判读,同 时对样本的要求比传统的血清学方法低,新鲜或存放较久的全血､唾液或核酸等都可以用于检测｡