动物造模 中国实验动物信息网 2022-05-09 1115

　　目的 建立小鼠肝炎病毒血清抗体ELISA检测方法，用于本地区MHV的日常监测，以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。

　　方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59，通过L929 细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠，获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。

　　结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1，建立了病毒扩增及浓缩纯化方法，制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平，可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物*佳工作浓度分别为4.0 μg/mL（10-7.73/0.1 mL TCID50）、1∶40和1∶4000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5.13%和5.57%;检测灵敏度为1∶4000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测，阳性血清相符率97.37%（37/38），阴性血清相符率92.19%（118/127）。

　　结论  本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性，，可以用于本地区MHV日常病原学监测，以便对小鼠感染状况作出准确判断。