动物造模,荧光定量PCR 中国实验动物信息网 2024-04-19 798

　　目的 建立小鼠肝炎病毒（MHV）实时荧光定量PCR检测方法，并初步应用于实验裸腰鼠等啮齿类动物的检测。

　　方法 选择MHVE基因保守区域设计合成特异性引物和探针，建立荧光定量PCR方法，并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证。同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测。

　　结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为（1×101~1×109）拷贝/μL，与仙台（SV）病毒、呼肠孤病毒3型（Reo3）、小鼠肺炎病毒（PVM）、牛冠状病毒（BCV）均无交叉反应，方法的检测敏感度为10拷贝/L。重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5%。检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。建立的方法与RT-PCR比较，可信度达97.47%。

　　结论 建立的MHV 荧光定量PCR方法特异、敏感，能够对多种啮齿类动物体内携带的 MHV 进行检测。