动物造模,基因敲除 中国实验动物信息网 2023-04-07 1249

　　目的 建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,初步探究该基因缺失对造血系统发育的影响。

　　方法 利用 CRISPR/ Cas9 技术构建 Marcksl1 基因敲除小鼠,通过 PCR 技术以及 Sanger 测序方法鉴定小鼠基因型。 通过将敲除 小鼠与野生型小鼠杂交,分析敲除小鼠的传代情况。 通过杂合子小鼠相互杂交,分析发育不同阶段纯合子、杂合子 和野生型小鼠的占比。 分离小鼠胎肝,利用血常规以及流式细胞术分析该基因缺失对造血系统的影响。

　　结果 PCR 结合 Sanger 测序结果表明 Marcksl1 基因敲除小鼠构建成功。 对不同阶段胚胎小鼠基因型鉴定和数量统计,发 现小鼠 Marcksl1 基因敲除造成的胚胎死亡发生于胚胎发育后期。 通过血常规与流式细胞分析,结果表明 Marcksl1 基因缺失在 E15. 5 d 时不影响白细胞,红细胞以及血小板数量,但胎肝中造血干细胞比例显著增多。

　　结论 本研究成功建立 Marcksl1 基因敲除小鼠,并发现该基因缺失影响造血干细胞占比。 本研究为进一步了解该基因在胚胎发 育和造血系统中的功能提供动物模型。