动物造模 中国实验动物信息网 2024-02-22 865

　　目的 比较细菌人工染色体转基因小鼠研制中的几个关键因素如实验小鼠遗传背景、BAC质粒注射浓度、BAC质粒片段大小和BAC注射液存放时间等，优化BAC转基因小鼠研制技术。

　　方法 采用相同的BAC DNA制备方法，分别选取C57BL/6J（B6）和FVB/N 两种实验小鼠，用质量浓度分别为 0.75、1.0、1.5 和 2.0 ng/µL 的 BAC 注射液进行胚胎显微注射，分析不同BAC DNA片段大小和BAC载体DNA制备后至注射前的时间长度，比较小鼠出生率、转基因小鼠阳性率。

　　结果 用FVB/N为背景的转基因小鼠阳性率较用C57BL/6J高（P＜0.05）。4个BAC质粒注射质量浓度对应的C57BL/6J和FVB/N仔鼠出生率由高到低排序依次为0.75 ng/µL组>1.5 ng/µL组 >1.0 ng/µL组>2.0 ng/µL组。4个BAC质粒质量浓度注射时，C57BL/6J转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为 1.5 ng/µL>1.0 ng/µL>2.0 ng/µL=0.75 ng/µL，FVB/N 转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为1.5 ng/µL>1.0 ng/µL>2.0 ng/µL>0.75 ng/µL。当 BAC 片段大小为 197 kb 时，仔鼠出生率*高，为 （22.49±9.41）%；片段大小为99 kb时仔鼠出生率*低，为（13.61±15.65）%；当BAC片段为197 kb时，转基因小鼠阳性率*高，为（13.56±12.88）%，极显著高于114 kb（P＜0.01），显著高于99 kb（P＜0.05）。BAC注射液的存放时间与转基因小鼠阳性率并不呈线性关系。

　　结论 相较于C57BL/6J，FVB/N背景更适于BAC 转基因小鼠的研制。BAC 注射液质量浓度为 1.5 ng/µL 时，阳性转基因小鼠的制备效率*高。BAC片段大小并非阳性转基因小鼠的限制因素。BAC载体DNA制备后1周内完成注射的效果*佳。