动物造模,神经干细胞移植 中国实验动物信息网 2022-11-18 889

　　目的： 探讨bcl-2基因修饰神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤神经功能恢复的影响。

　　方法： 体外培养大鼠神经干细胞，经Ad-EGFP为载体介导端B淋巴细胞瘤-2基因（bcl-2）基因转染神经干细胞，分为3组：对照组、阴性转染组、bcl-2转染组。Western-blot检测神经干细胞在转染前后bcl-2蛋白的表达。成年雌性SD大鼠85只，造模成功72只，随机分为对照组，NSCs组，bcl-2-NSCs组，24只/组，按照改良的Allen打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。通过BBB评分、斜板试验进行运动功能评定。造模后7 d通过RT-PCR及Western-blot检测检测脊髓损伤区周围HSP27、c-fos基因的表达，TUNEL法检测细胞凋亡情况。造模后4周取材行病理切片HE染色及荧光显微镜观测EGFP标记的NSC存活及分布情况，通过SEP和MEP观察大鼠神经电生理恢复情况。

　　结果： bcl-2基因转染大鼠神经干细胞后，bcl-2转染组与对照组、阴性转染组相比bcl-2基因和蛋白水平均有表达（P<0.05）；大鼠下肢运动功能评价bcl-2-NSCs组优于NSCs组，NSCs组优于对照组。造模后72 h，bcl-2-NSCs组细胞凋亡数均明显低于对照组和NSCs组（P<0.05）。造模后7 d，与对照组和NSCs组相比，bcl-2-NSCs组HSP27基因和蛋白的表达均较显著升高（P<0.05），bcl-2-NSCs组c-fos基因和蛋白的表达较显著降低（P<0.05）。造模后4周，HE染色对照组可见脊髓组织缺失及脊髓空洞形成，无神经轴索通过。NSCs组损伤区可见少量神经轴索样结构，脊髓空洞较小，bcl-2-NSCs组可见较多神经轴索样结构，未见脊髓空洞。EGFP标记的阳性细胞数：bcl-2-NSCs组*多，NSCs组次之，对照组未见，且各组之间差异有显著性（P<0.05）。造模后4周，SEP和MEP的潜伏期：bcl-2-NSCs组NSCs组>对照组，且各组之间差异有显著性意义（P<0.05）。

　　结论： 通过Ad-EGFP为载体介导端B淋巴细胞瘤-2基因（bcl-2）基因转染使神经干细胞能够促进体外培养的大鼠神经干细胞增殖。bcl-2基因修饰神经干细胞移植可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生，升高脊髓损伤区HSP27表达，降低脊髓损伤区bcl-2基因的表达和神经细胞凋亡，改善大鼠的肢体运动功能和电生理功能。