动物造模 中国实验动物信息网 2024-01-16 850

　　目的： 探讨小鼠体外受精冻融后用于Cas9注射的可行性。

　　方法： 新鲜C57BL/6J小鼠卵子IVF后采用冻存管法（EFS20/40）冷冻原核胚（单细胞胚）和2细胞胚胎，次日复苏后培养。比较冻融原核胚和2细胞胚胎的回收率及成活率。选取部分冻融原核胚与新鲜原核胚同时进行Cas9和稀释液胞质注射并培养至2细胞，分别比较注射后的存活率及2细胞发育率。

　　结果： 冻融后的B6小鼠原核胚的回收率为92.5%、成活率为92.8%，2细胞胚的回收率为90.5%、成活率95.8%，两组数据差异无显著性（P>0.05）。新鲜原核胚Cas9注射后的存活率为92.7%，空白组注射组为97.5%，冻融原核胚Cas9注射后的存活率为82.6%，空白组为92%，冻融组Cas9注射与各组差异有显著性（P<0.05），其它各组差异无显著性（p>0.05）。注射后的2细胞胚发育率差异无显著性（P>0.05）。

　　结论： 冻融原核胚可用于Cas9显微注射。