动物试验,精子畸形 中国实验动物信息网 2020-08-13 847

　　小鼠的精子异常是遗传控制的，具有很高的遗传力。许多常染色体和X和Y性染色体基因直接或间接地决定了精子的形态。精子异常主要是指形态异常。已知精子异常决定精子发生。形态基因突变的结果。因此，形态变化表明相关基因及其蛋白产物的变化。小鼠精子异常检测可以检测环境因素对精子产生和发育的影响，从而导致已知生殖细胞高度诱变，因此该检测是人体生殖细胞环境因子的诱变剂。可用于检测性影响。

　　设备和试剂

　　除非另有说明，否则所有试剂均为分析纯，测试水为蒸馏水。

　　1实验实验设备。

　　2生物显微镜。

　　3 M乙醇。

　　4 1％？2％曙红染色溶液：称取1-2g曙红，溶于100mL蒸馏水中。

　　6-8周大的动物（ 25-35g）。 2个剂量分组阴性对照组（溶剂），阳性对照组和3个测试组，每组至少有5只存活的动物。物质是环胺磷酸酯40-60mg /（kg·d）或甲磺酸甲酯（MMS）50mg /（kg·d），丝裂霉素C（MMC）1.0-1.5mg /（kg·d）。*高剂量可被视为*大耐受剂量，或分别为1/2、1/4和1/8 LD50的剂量组。连续5天口服。

　　3操作步骤

　　3.1动物运行时间：不同的致病性变异作用于精子发育的不同阶段，并且在暴露于某些突变体后可能在不同的时间导致精子变形。有。因此，如果条件允许，可以在给予受试物质1、4和10周后杀死动物以确定精子的形态。大多数化学诱变剂在精原细胞晚期或原代精原细胞中产生。因为它对细胞更敏感，所以通常在*剂测试物质后35天进行。取出两只老鼠和附睾，将它们放在装有适量生理盐水（1 mL）的小烧杯中或置于含有2 mL盐水的培养皿中。垂直用1-2把刀用眼科剪刀剪掉附睾，静置3-5分钟。轻轻摇动5分钟。用4层镜头清洁纸或合成纤维血网袋过滤，然后吸出滤液涂片。风干后，用甲醇固定5分钟以上，然后干燥。用1％至2％曙红染色1小时，用水冲洗，干燥。

　　3.3显微镜检查：查找低功率（使用绿色滤镜），背景清晰和精子重叠少的区域。用大功率检查精子的形态并计算完整结构中的精子数量。精子有头但没有尾巴（轮廓不清晰），或者如果头部与其他精子或碎片重叠，或者明显是人造的，则不计算在内。每只动物至少检查1,000个精子。

　　精子异常主要出现在头部，然后出现在尾巴。变体分为无钩，香蕉形，粗头，无定形，尾部折叠，双头，双尾等。记录每个精子的显微镜坐标，分别记录异常类型，并计算精子变形率和精子变形型的组成比。

　　在区分双头和双尾变体时，请注意两个精子之间的差异，确定部分重叠的阶段。当将其判断为无定形时，有必要将其与人工切割和折叠区分开来。统计方法和测定结果每个剂量组应通过参数统计方法（例如使用威尔科森等级）与相应的阴性对照组进行比较。总检测方法阳性的精子异常的评价标准是异常率是阴性对照组的两倍以上或具有统计学意义，并且存在剂量反应关系。

　　一般阴性对照组的精子异常率为0.8％至3.4％，供您参考，但请参考本实验室使用的实验动物的自然变形率。