动物造模,猴D型逆转录病毒 中国实验动物信息网 2023-05-25 1283

　　目的： 构建猴D型逆转录病毒的p27蛋白，并建立流式免疫荧光微球检测技术用于猴D型逆转录病毒的检测。

　　方法： 通过PCR扩增p27基因片段，与pGEX-4T-1表达载体进行连接，转化至BL21（DE3）进行表达。通过SDS-PAGE分析蛋白表达的形式及*佳诱导时间。采取GST树脂纯化目标蛋白，包被磁珠，建立流式免疫荧光微球检测技术，用于临床样本的检测。

　　结果： 重组蛋白以可溶的上清液进行表达，诱导的*佳时间为4 h。包被磁珠后，成功建立流式免疫荧光微球检测技术，对阳性血清稀释81倍仍可检测为阳性，对猴类其他病原的阳性血清无交叉反应，特异性强，与ELISA法同时对24份临床样本进行检测，其中3份样品的流式免疫荧光微球检测结果为阳性，ELISA检测结果为2份阳性，1份阴性，两种方法的检测结果符合率为96%。

　　结论： 成功表达猴D型逆转录病毒p27蛋白，并运用该蛋白建立了灵敏度高，特异性强，样本需求少的流式免疫荧光微球检测技术，为后续推广应用多重流式免疫荧光微球检测技术奠定了基础。