动物造模 中国实验动物信息网 2022-06-21 1183

　　目的：繁育和鉴定 FOXO3A 基因敲除小鼠,选育的 FOXO3A 基因敲除杂合型小鼠用于保种,纯合型 小鼠用于实验｡ 初步分析 FOXO3A 基因敲除对小鼠造血细胞表型的影响,为后续 FOXO3A 基因对造血细胞损伤的 调节研究奠定基础｡

　　方法：杂合型雌鼠与野生型雄鼠交配,选育出杂合型雌鼠和杂合型雄鼠,采用一雄一雌或一 雄两雌同笼合养方式进行繁育获得纯合型小鼠;繁育的幼鼠剪趾标号,剪尾提取基因组DNA,采用PCR方法进行 基因型鉴定,鉴定获得100bp/186bp两条条带的为杂合型小鼠(FOXO3A+/-),鉴定获得186bp条带的为纯合型小 鼠(FOXO3A-/-),鉴定获得100bp条带的为野生型小鼠(FOXO3A+/+,WT);采用流式细胞术对鉴定出的野生型和纯 合型小鼠进行骨髓细胞分型分析｡

　　结果：FOXO3A 基因敲除小鼠已成功繁殖鉴定,子代基因敲除纯合型小鼠与杂 合型小鼠长势正常,与野生型FVB/N小鼠相比外观､生长发育未见明显差异;已得到一定数量的纯合型小鼠用于 后续实验;骨髓细胞计数结果显示,FOXO3A 基因敲除纯合型小鼠骨髓有核细胞计数与野生型小鼠相比[(6.167± 1.424)vs.(10±1.732)],未见明显差异(P=0.1625);流式分析结果显示:FOXO3A 基因敲除小鼠骨髓中造血祖 细胞(lin-scal-1-ckit+,HPC)比例明显升高(P<0.05),造血干细胞(lin-scal-1+ckit+,hsc)比例没有明显差异;造血 p="">0.05)｡

　　结论：经基因型鉴定已成功获得 FOXO3A 基因敲除小 鼠｡ 初步探讨 FOXO3A 基因敲除对小鼠骨髓细胞计数及分型未见明显影响,FOXO3A 基因敲除对小鼠造血细胞的 影响需要进一步的实验加以证明｡