动物造模,基因敲除 中国实验动物信息网 2024-03-11 565

　　目的:运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中 Bmp9基因片段,构建 Bmp9基因敲除小鼠｡ 方法 根据 Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成｡ sgRNA体外转录后和Cas9mRNA混合后显微注射受精卵 细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠｡ 提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型｡ 基因 型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠｡ 同时取纯合子小鼠心脏､肝､脾､肺､肾,匀浆后提取总RNA 和总蛋白,通过qPCR､WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达｡

　　结果:设计并合成20bp的sgRNA并进行 体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子｡ 测序结果显示,突变小鼠存在两种 基因型,一种为5bp缺失突变,另一种为13bp缺失并伴有1bp插入突变｡ 与野生型C57BL/6相比,qPCR､WB和 免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显著降低｡

　　结论:利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9 基因敲除小鼠｡