动物造模 中国实验动物信息网 2022-05-17 521

　　目的　 构建淋巴细胞活化基因￣３(Ｌａｇ￣３)基因敲除小鼠，初步分析 Ｌａｇ￣３基因敲除对小鼠表型影响， 为后续Ｌａｇ￣３体内功能研究提供动物模型。

　　方法　 利用ＣＲＩＳＰＲ/Ｃａｓ９技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠，通 过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠，利用ＲＴ￣ＰＣＲ和流式检测方法进一步验证 Ｌａｇ￣３基因敲除小鼠体内 Ｌａｇ￣３基因敲除效果，通过建立ＣｏｎＡ诱导的肝损伤模型研究 Ｌａｇ￣３基因在体内的功能。

　　结果　 ＰＣＲ和产物测序结果显示，获得了ｅｘｏｎ２缺失的 Ｌａｇ￣３基因敲除小鼠，该基因敲除纯合子小鼠(Ｌａｇ￣３－/－)经刀豆蛋白(ＣｏｎＡ)刺激后，小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到Ｌａｇ￣３ｍＲＮＡ本底表达信号，小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的Ｌａｇ￣３阳性细胞，表型分析发现，Ｌａｇ￣３基因的缺失显著减少了ＣｏｎＡ诱导的小鼠外周血、骨髓和脾ＣＤ３＋Ｔ细胞的数量，减轻了ＣｏｎＡ诱发的急性肝损伤情况。

　　结论　 成功构建 Ｌａｇ￣３基因敲除小鼠模型，肝损伤过程中的体内功能研究显示，Ｌａｇ￣３缺失可以显著缓解ＣｏｎＡ引发的肝损伤的发生。