动物造模 中国实验动物信息网 2021-11-02 1045

　　目的    分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C，CST3）cDNA序列同源性，并建立CST3蛋白原核表达体系，为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。

　　方法    对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体，完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中，通过异丙基硫代半乳糖苷（lsopropyl β-D-Thiogalactoside，IPTG）诱导实现CST3蛋白的原核表达，并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western blotting）验证。

　　结果    长爪沙鼠Cst3 基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3 表达序列插入到pET28a质粒中，获得了CST3蛋白表达载体。经I mmol/L IPTG 37℃诱导12h，可获得大量CST3蛋白。

　　结论    成功地构建了长爪沙鼠 CST3 蛋白的体外表达体系。