动物模型,视网膜脱离 中国实验动物信息网 2020-08-08 796

　　（1）复制方法（1）兔皮肤成纤维细胞的培养：将一只重约2 kg的新西兰兔切成1块，用75％的乙醇消毒皮肤，并使用眼角膜曲华宁在真皮上切成直径8 mm的切口。分离纽扣状的皮肤组织，并用剪刀将其除去，用无菌盐溶液冲洗几次，然后用小烧杯切成1mm3、铺在6孔35mm塑料培养板上，并加入适量的培养基（RPMI1640）加在37°C和5％CO 2的条件下培养含有15％牛血清和青霉素（每种100 U/ml）的培养基。培养基可以每周更换两次，通常需要7至10天，成纤维细胞可以附着在培养皿的底部并进行继代培养。在0.25％的胰蛋白酶消化，吸液，用D-Hanks溶液分散并离心（1000/min，5分钟离心）后，将细胞在200 ml玻璃培养瓶中培养。 （2）玻璃体内注射的细胞悬液的制备：将培养的细胞在瓶壁上稀释，分散并离心，然后加入D-Hanks溶液并用移液管制成细胞悬液。取少量悬浮液，以约9：1的比例混合锥虫蓝染料，使用血细胞计数器计数活细胞，*后每毫升细胞悬浮液添加2.5 x 1,000,000个细胞。稀释至浓度。使用结核菌素注射器抽吸并使用0.1 ml（包含2.5 x 100000个细胞）。 （3）玻璃体内注射：在注射之前，用1％阿托品眼药水将兔子的眼睛扩张2-3次，并肌肉注射氯胺酮（5mg/kg体重）以进行全身麻醉。在注射过程中，将1％甲基纤维素滴在角膜表面，并放置隐形眼镜。在手术显微镜下，将针插入边缘后3 mm，当针尖到达玻璃体中心时，以及当针尖从瞳孔到达玻璃体中心时，缓慢注入细胞悬液。

　　（2）模型的特征单元格当注入玻璃体并立即使用检眼镜检查时，可以看到玻璃体像灰尘一样浑浊，并且注入路径*密集..在第4天，玻璃体中形成少量的索状或膜状生长。在第7天，增殖物质到达眼睛的后极，并连接到视盘或髓质复合体的两侧。视网膜脱离发生在约14天之内，通常发生在双侧髓质综片的局部脱离，有些逐渐扩大并完全脱离。通常，没有视网膜孔形成。 （3）比较医学一种模型方法，其中将同种异体皮肤成纤维细胞注射到兔眼的玻璃体中，通过连续不断的细胞增殖形成增殖，并拉动和分离视网膜。该过程与人眼中增殖性玻璃体视网膜病变的临床特征非常相似。牵引性视网膜脱离的发生率直接反映了增生性玻璃体视网膜病变的严重程度，也可以用作衡量疾病抗药性的间接定量指标。因此，该模型方法为研究药物对增生性玻璃体视网膜病变的预防和治疗作用提供了理想的动物模型。但是，在创建模型时，您需要控制实验条件。兔子的眼球比人的眼球小，并且晶状体的前后直径较大，因此玻璃体腔相对较小。在进行玻璃体注射时，必须掌握针头的方向，以使针头不会损坏镜片。外伤性白内障会影响眼底检查。针尖到达玻璃体后，使用手术显微镜操作模型更为安全，因为必须注意不要损坏视网膜。