动物造模,荧光定量PCR检测,巨细胞病毒 中国实验动物信息网 2021-10-19 1484

　　目的：建立小鼠巨细胞病毒（MCMV）荧光定量PCR方法并初步应用。

　　方法：选择NCBI公布的MCMV Smith株DNA聚合酶基因的保守序列，设计引物探针，建立MCMV的荧光定量PCR方法，该方法的特异性、灵敏度、重现性和稳定性。成立。 ..该方法用于检测成年 MCMV 小鼠血液样本和 2018 年提交检测的 409 份小鼠血液样本。

　　结果：建立的MCMV实时PCR法标准曲线斜率为-3.418，R2值为0.999，扩增效率为96.137。可定量检测的MCMV*低含量为47拷贝/μl。 ..以大鼠巨细胞病毒、猿猴巨细胞病毒、人单纯疱疹病毒、伪狂犬病毒、I型疱疹病毒为模板时，无扩增曲线，特异性好。方法组内和方法组之间的变异系数为 0.39?0.68?0.48?1.01?曾是。重现性和稳定性良好。在人和小鼠血样中可检测到的 MCMV 病毒的*大稀释系数为 1:1000 (100.75TCID50/0.1 mL)，所有 409 份小鼠血样均为阴性。

　　结论：所建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法具有优异的灵敏度、特异性和稳定性，有效检测小鼠MCMV，监测实验室小鼠MCMV，并对相关标准进行补充和改进。