动物造模,肌肉特异表达Cas9 中国实验动物信息网 2021-07-01 1487

　　目的：通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性Cas9蛋白小鼠胚胎，为建立肌肉特异性Cas9小鼠动物模型奠定基础？

　　方法：设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶消化验证其活性。同时，利用异基因重组构建了肌肉特异性异基因靶向载体。osa26s gRNA和Cas9蛋白通过显微注射注射到小鼠胚胎中，通过PCR和测序检测胚胎编辑，并移植到假孕中。母鼠同时。生产；您是否将同源靶向载体与osa26s gRNA 和 Cas9 一起注入小鼠胚胎并通过 PCR 检测整合？

　　结果：体外酶切实验表明体外转录的sgRNA与Cas9蛋白结合可以编辑靶位点；成功构建肌肉特异性同源靶向载体Donor-SP-px459，获得Rosa26基因编辑胚胎原核注射，移植获得Rosa26基因编辑小鼠；注射后同源靶向载体，肌肉特异性表达Cas9蛋白，成功获得基因靶向小鼠胚胎？

　　结论：利用CRISPR/Cas9技术，我们成功获得了Rosa26基因编辑的胚胎和小鼠，获得了肌肉特异性Cas9蛋白表达基因打靶构建肌肉特异性Cas9表达小鼠小鼠胚胎供使用。为大鼠动物模型奠定基础？