动物造模,巨噬细胞 中国实验动物信息网 2021-06-29 2301

　　目的：构建并鉴定巨噬细胞条件下的Atg5基因敲除小鼠，为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型。

　　方法：将引入的LysM-Cre小鼠与Atg5flox/+和自交的Atg5flox/+小鼠交配，分别获得Atg5flox/+Cre+/-和Atg5flox/floxCre-/-的后代。小鼠；交配后代小鼠。比较以上两种基因型获得巨噬细胞条件敲除小鼠（Atg5flox/floxCre +/-，Atg5-/-）和对照小鼠（Atg5flox/floxCre-/-），Atg5 +/+）。提取小鼠尾部组织基因组 DNA、PCR 扩增和琼脂糖凝胶电泳，并在 DNA 水平对小鼠进行基因分型。从小鼠骨髓中提取巨噬细胞NA 和蛋白质，并使用基因测序和蛋白质印迹技术测试 Atg5 基因的敲除效果。

　　结果：成功建立巨噬细胞条件下的Atg5基因敲除小鼠模型，小鼠存活可育。在基因和蛋白水平上，巨噬细胞Atg5基因被成功敲除，Atg5小鼠的自噬基础水平低于Atg5小鼠（p62显着增加，LC3II显着降低）。普通基础水平。

　　结论：本研究利用Cre/loxp系统成功构建并鉴定了条件性巨噬细胞Atg5基因敲除小鼠，从动物水平研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用，为研究提供了一个研究平台。