动物造模 中国实验动物信息网 2021-06-22 1324

　　目的：建立一种环介导等温扩增（LAMP）检测粪沙门氏菌树鼩的方法并初步应用该方法。

　　方法：根据沙门氏菌种特异性基因invA（浸润蛋白基因A）的保守序列设计合成特异性LAMP引物。分别设置10个反应温度（57°C-66°C）和10个反应时间（24-42分钟）进行优化，以确定该方法的特异性和灵敏度。同时，进行正常的PCR实验来验证和比较这一点。使用已建立的 LAMP 方法，从野生来源检测到 91 份树鼩稀便样本。

　　结果：在优化的反应条件下，选择反应温度62℃，反应时间34分钟。该方法对沙门氏菌的灵敏度达到3.36×101 CFU/mL，是常规PCR方法的10～100倍。对 10 只树鼩的肠道微生物群进行了 LAMP 检测，只有肠炎沙门氏菌和沙门氏菌属的沙门氏菌 B 呈阳性，其余呈阴性。对 91 份野生树鼩粪便样本进行了 LAMP 检测，结果呈阳性。 20.88?LAMP法的所有反应能在40分钟内完成吗？目视观察颜色变化可直接判断结果。

　　结论：建立的LAMP方法方便、快速、灵敏、特异，可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测。