动物造模,多瘤病毒荧光PCR检测方法 中国实验动物信息网 2021-12-16 1431

　　目的：建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法，探讨裸鼹鼠多瘤病毒感染情况。

　　方法：将小鼠多瘤病毒（Genbank：NC_001515）的核苷酸序列与NCBI进行比较，选择储存区，设计引物和探针，建立多瘤病毒荧光定量PCR方法，并验证该方法的灵敏度和特异性。九只 1 天大的 KM 哺乳期小鼠被人工感染。 21天后，采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物、血液等组织器官，验证所建立的荧光PCR方法，用于检测盲肠内容物62份样品裸肝大鼠。

　　结果：建立的检测方法特异性强，以多瘤病毒为模板，出现清晰的荧光信号。以猴液泡病毒、小鼠K病毒、小鼠细小病毒、大鼠细小病毒H-1株为模板时，无荧光信号。该方法的*低检测限为 100 拷贝/μL。在人工感染小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和盲肠内容物中检测到多瘤病毒核酸。在大脑、胸腺和血液中检测到的含量*高。裸鼹鼠盲肠内容物的 62 个样本为多瘤病毒阴性。

　　结论：建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可以有效检测动物组织中的多瘤病毒。自然感染多瘤病毒的裸鼹鼠的研究可作为制定实验裸鼹鼠微生物标准的参考。