抑制素基因敲除小鼠模型,动物造模 中国实验动物信息网 2021-10-29 1461

　　目的：使用聚类的，规则间隔的短间隔回文重复序列（CRISPR）/ CRISPR相关蛋白9（Cas9）]基因编辑技术构建抑制素基因敲除小鼠模型，并进行初步表型分析，创建一个类型。

　　通过根据方法抑制素α亚基的*个外显子的碱基序列设计单个指导RNA sgRNA识别序列，构建了sgRNA表达质粒。用T7NA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA后，将sgRNA/Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，并通过PCR和基因测序检测新生小鼠抑制素α亚基的基因碱基突变。选择具有纯合F2基因敲除的雄性和雌性小鼠，观察雄性睾丸和雌性小鼠卵巢，并进行石蜡切片和HE染色分析。

　　结果：总共获得了12只FO代抑制素基因敲除小鼠。将8只雄性小鼠和C57BL/6J雌性小鼠回交以获得F1代小鼠，然后交配以获得F2代小鼠。 F2代小鼠的基因型比例符合孟德尔定律，而敲除小鼠并非具有胚胎致死性。 F2纯合子小鼠出现癌性睾丸和卵巢，无法生育。

　　结论：我们已经成功构建了抑制素基因敲除小鼠模型。 F2纯合小鼠的癌性表型表明抑制素在小鼠生殖系统中起重要作用。