目的:建立EV71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型。
方法:通过胰蛋白酶消化获得树sh的原代肾细胞,用EV71感染树sh的肾细胞,并用Western blot和间接免疫荧光法分别对1、2、4、6进行测定,并在8℃测量培养上清液的病毒滴度。在每个细胞中,检测EV71病毒VP1蛋白的表达,并测定EV71病毒对虾原代肾细胞的感染性。
结果:对树sh的分离出的原代肾细胞进行传代,纯化,形态学鉴定,并建立了基于树sh的原代肾细胞的细胞培养物。在树感染的原代肾细胞中感染EV71病毒后,病毒滴度在感染后48-96小时可达到1.3×106 TCID50/mL,并且EV71病毒感染在树感染的原代肾细胞中,表明它可以被有效感染。并有效地传播了。 Westernblot检测可在感染后2-8天有效地在树原代肾细胞中检测到EV71病毒VP1蛋白,并在感染后2-6天间接检测到细胞质中的病毒VP1蛋白分布。免疫荧光。
结论:在成功建立Tree Schrew原代肾细胞培养物的基础上,确定了EV71病毒对Tree Schrew原代肾细胞的感染性和病毒生长特性,并确定了EV71 Tree Schrew原代肾细胞感染模型。