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动物造模,记忆获得障碍模型
中国实验动物信息网
2023-01-13
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1.造模材料 动物：健康昆明种小鼠；药物：东莨菪碱；器械：MR-921型小鼠跳台实验自动记录仪。
2.造模方法 以东莨菪碱3mg/kg腹腔注射，10min后开始跳台法训练。次日，测试记忆成绩。
跳台法：首先将小鼠置于跳台仪中，适应环境5min后，轻放于平台上，当动物从跳台上跳下四肢接触铜栅时，即给予40V交流电压刺激，记录小鼠的EL值，并记录5min内的触电次数(错误次数)，以此作为学习成绩。24h后进行测试，将小鼠置平台上，记录其SDL值及其3min内受电击的次数(错误次数)，以此评价其记忆能力。测试时，若小鼠停留在平台上超过3min，其潜伏期以180s计。
3.造模原理 东莨菪碱所致记忆障碍的脑内突触机制可能与其引起脑内胆碱能神经系统突触体内蛋白质合成能力下降，继而导致突触界面结构参数的改变有关。
4.造模后变化 跳台实验显示，造模组动物与对照组动物相比较，正常对照组学习时错误次数为(2.16±1.15)次，记忆时错误次数为(0.33±0.50)次，潜伏期学习(EL)为(13.8±4.7)s，记忆(SDL)为(155.6±49.3)s；模型组学习时错误次数为(6.38±2.62)次，记忆时错误次数为(2.16±1.13)次，潜伏期学习为(25.6±7.1)s，记忆为(58.3±21.6)s，学习成绩较差，表现为反应时间延长，错误次数增多。
(二)戊巴比妥致记忆获得障碍模型
1.造模材料 动物：健康昆明种小鼠；药物：戊巴比妥。
2.造模方法 训练前30min，腹腔注射15mg/kg戊巴比妥，连续训练5天，训练中仍每天给药1次，每次训练均可测量其方向辨别性学习记忆功能，也可于训练前30min腹腔注射30mg/kg或训练前20min腹腔注射20mg/kg戊巴比妥，可观察到记忆获得障碍。
3.造模原理 戊巴比妥为中枢抑制剂，主要致方向辨别性学习记忆障碍。
4.造模后变化 造模后采用电迷宫法进行方向辨别性学习记忆功能测试，空白对照组错误次数为(3.3±1.7)次；模型组错误次数为(5.7±2.1)次，显示记忆获得障碍。
(三)樟柳碱致小鼠记忆获得障碍模型
1.造模材料 动物：NIH系幼年小鼠，16～18g；药物：樟柳碱；器械：跳台仪。
2.造模方法 训练前20min，腹腔注射10mg/kg樟柳碱，训练后测量其学习记忆功能。
3.造模原理 樟柳碱致方向辨别性学习记忆障碍。
4.造模后变化 测定结果，对照组：潜伏期为(293.2±94.5)s，5min内错误次数为(0.3±0.6)次；模型组：潜伏期为(69.5±102.7)s，5min内错误次数为(1.6±1.4)次。结果表明，模型组与对照组比较，模型组潜伏期显著缩短，5min内错误次数明显增多，说明樟柳碱腹腔注射已造成记忆获得障碍。
(四)氯化铝致动物学习记忆障碍模型
1.造模材料 动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重(22±2)g；药物：氯化铝；器械：微量注射器，跳台仪。
2.造模方法 造模组小鼠腹腔注射戊巴比妥40mg/kg，麻醉后用碘酒、酒精消毒头顶部皮肤，纵向切开颅顶正中皮肤约5mm长，暴露颅骨，在前囟(breg-ma)点后1mm、中线旁开2mm处插入微量注射器，进行脑室内注射，进针深度约2.5mm。*天进行左侧脑室注射，空白对照组注入生理盐水2μl/只其他各组注入1％AICl3 2μl/只，第二天进行右侧脑室注射，方法和剂量同前。在首次脑室注射的48h后采用跳台法进行被动回避性条件反应实验，记录潜伏期、错误数。
3.造模原理 脑室内注射氯化铝能抑制条件性回避反应，引起动物学习记忆障碍。
4.造模后变化 测试结果：对照组动物潜伏期为(238.58±86.82)s，模型组为(142.63±111.63)s；对照组错误数为(0.58±0.79)次，模型组为(1.75±1.49)次。结果表明，模型组小鼠的潜伏期明显缩短，错误次数增加，出现学习记忆障碍。
(五)β-淀粉多肽片段诱导的学习记忆障碍模型
1.造模材料 动物：SD大鼠，体重280～320g；药物：β-淀粉多肽，戊巴比妥；器械：保温箱，微量进样器。
2.造模方法 将β-淀粉多肽用无菌生理盐水配置成一定浓度，-20℃保存。使用前将β-淀粉多肽溶液在37℃保温箱中放置7天，以形成聚集态的β-淀粉多肽。取SD大鼠，雌雄兼用，戊巴比妥麻醉，头顶部去毛，消毒皮肤并切开，立体定位仪上固定，于双侧海马内注射β-淀粉多肽溶液，注射点定位：AP=-3.5mm，ML=±2.0mm，DV=2.7mm，微量进样器垂直进针，5min内注射完毕，留针5min，缓慢起针。局部消毒后缝合皮肤，肌内注射抗生素抗感染。单笼饲养至大鼠完全清醒。3天后进行行为测定实验。
3.造模原理 阿尔茨海默病以进行性记忆减退和智力低下为主要表现，其神经病理特征之一是：大脑皮质萎缩、细胞外存在大量由β-淀粉样蛋白组成的老年斑，以及皮质动脉和小动脉的血管淀粉样变性。因此采用β-淀粉多肽给大鼠海马内注射可以复制出学习记忆功能障碍的动物模型。
4.造模后生化变化 采用跳台法测试动物学习记忆功能的改变，记录5min内大鼠触电次数即累积错误次数(Ns)、平台滞留时间和累积刺激时间(Ts)。空白组平台滞留时间、Ts、Ns分别为293.0±18.52，6.5±3.2，0.125±0.35；β-淀粉多肽组分别为254.1±3.77，44.3±4.2，1.125±0.83，与空白组比较，存在显著性差异。
5.注意事项 手术器械严格消毒，防止手术感染，手术创伤应尽可能小，严格无菌操作。饲养室内尽可能保持动物的*适温度、湿度。
(六)叠氮钠致学习记忆障碍模型
1.造模材料 动物：SD大鼠，雄性，3月龄，体重(300±22)g；药物：叠氮钠溶液(叠氮钠用无菌生理盐水配制)240mg/ml；器械：微泵。
2.造模方法 将叠氮钠用无菌生理盐水配置为240mg/ml溶液，精确吸取2ml液体注入微泵囊内，将流量调节器缓慢插入囊内。大鼠麻醉后，于大鼠背部中心向右向下各1cm处与脊柱平行切开皮肤1cm，向头侧钝性分离2～3cm，放入微泵，使微泵释放口朝向大鼠头部，缝合皮肤，每小时2mg/kg持续释放30天。
3.造模原理 线粒体缺陷与多种神经退行性疾病关系密切，其中细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase, COX)长期、缓慢的抑制可引发学习记忆障碍。因此，利用线粒体细胞色素C氧化酶抑制剂叠氮钠可造成学习记忆障碍模型。
4.造模后变化 4星期后出现学习记忆功能障碍。
5.注意事项 全部操作需无菌进行。