动物造模,缺血再灌注肾损伤动物模型 中国实验动物信息网 2021-03-26 1089

　　（1）繁殖方法将戊巴比妥钠30 mg/kg体重腹膜内注入体重200至220 g的雄性Wistar大鼠中，并仰卧固定在手术台上。定期对动物的腹部手术区域进行消毒和脱毛，在小腹部切开约2 cm的切口，在腹部后分离出左肾动脉，并用完整的动脉夹将左肾动脉夹住60分钟。之后，恢复灌注，并同时取出右肾。灌注时间（1、3、6、24小时）分为4组。在再灌注前5分钟对治疗组进行静脉注射，将假手术组（不阻塞肾血流）作为对照，并在相应的时间点收集血液和肾脏。自动化的生化分析仪可测量血清尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）的水平。肾组织的常规石蜡切片用HE染色，并用光学显微镜观察肾组织的病理变化。

　　（2）模型特征缺血再灌注（IR）后，P-选择素在大鼠肾脏组织中显着表达，MDA含量增加，SOD活性降低，并出现明显的细胞凋亡和组织病理学变化。再灌注后24小时，实验组的血清BUN和Cr明显高于假手术组。再灌注1小时后，在光学显微镜下，实验组的肾皮质变白，肾髓质变黑，肾小管上皮细胞肿胀。变性和坏死，间质充血和水肿以及炎性细胞浸润。肾脏血流受阻并恢复灌注后，肾组织会出现肾功能下降和明显的病理变化。肾小管上皮细胞明显肿胀，不同程度出现变性和坏死，并且肾间质充血和水肿与炎性细胞浸润有关。缺血和再灌注后，肾脏会产生大量的氧自由基，消耗内源性抗氧化剂，显着降低其清除氧自由基的能力，并损害肾脏。此外，大量的氧自由基的产生可导致细胞DNA变性，蛋白质氧化，脂质过氧化甚至细胞死亡，这也是导致缺血再灌注过程中细胞凋亡的因素。

　　（3）比较医学缺血再灌注损伤在临床上非常普遍，但其病理损伤机制仍不清楚。近年来，粘附分子及其介导的白细胞和内皮细胞的粘附被认为是缺血-再灌注损伤的重要因素。通过粘附分子抑制嗜中性粒细胞的浸润和聚集已显示出预防或减轻由缺血-再灌注引起的器官损伤。缺血-再灌注肾病的动物模型也可以用于体重为2-3kg的成年日本白兔。通过耳静脉注射1％戊巴比妥钠2.5ml/kg体重来麻醉兔子，无菌地打开腹部，取出左肾，并夹住右肾动脉1小时。取出以恢复血液再灌注。手术后48小时使动物昏迷，从下腔静脉采血，并通过苦味酸比色法测量血清Cr含量。缺血-再灌注肾病的动物模型也可用于灌输自体全血的分离的猪肾脏中，这些肾脏捐献了50-80公斤的肾小型猪。所有供体猪都被震惊和刹车。打开对照组的腹部后，取一小部分肾脏，放在冰盒中进行测试。肾缺血后50分钟收集缺血组的肾皮质，其检测与对照组相同。实验组使用了分离的猪肾缺血-再灌注损伤模型。再灌注后0、0.5、1.5和2.5小时收集血浆，并测量LDH酶活性。