疾病动物模型,H7N9禽流感病毒 中国实验动物信息网 2021-03-08 591

方法

　　1 动物分组

　　小鼠按照体重随机分为生理盐水对照组、高、中、低感染剂量组，每组10 只，分别接种1 × 108，1× 107 或1 × 106 TCID50的病毒用于观察临床症状和死亡率。另外30 只小鼠接种1 × 106 TCID50的病毒，分别于攻毒后1、2、3、5、7 d 随机挑选6 只安乐死，用于病毒载量检测和组织病理学观察。

　　2 攻毒

　　小鼠用浓度为20 mg /mL 的盐酸氯胺酮注射液肌肉注射麻醉，麻醉剂量每只小鼠0. 1 mL。将50μL 1 × 108、1 × 107 或1 × 106 TCID50的H7N9 禽流感病毒原液用移液器滴入小鼠鼻腔; 对照组小鼠滴入50 μL 生理盐水。接毒后的小鼠正常饲养，供给饲

　　料量为标准日粮，饮水用高压灭菌水，足量供给。

　　3 观察指标

　　攻毒开始前的时刻记为0 天，攻毒后14 d 内每隔24 h 观察一次，包括小鼠的活动、反应性、饮食、呼吸及有无弓背、竖毛、蜷缩、颤抖和死亡等。每天用电子秤测量体重。

　　2. 4 病理检查

　　攻毒后1、2、3、5、7 d 随机挑选3 只小鼠安乐死，取心、肝、脾、肺、肾、脑、肠用于病理标本制备，病理标本制备方法采用甲醛固定，石蜡包埋、切片，H． E 和免疫组化染色。免疫组化染色采用SP 法:一抗稀释度1∶ 200，4℃过夜，PBS 洗; 加二抗，室温孵育10 min，PBS 洗; DAB 显色，苏木素衬染后脱水、透明、中性树胶封片。

　　 5 病毒载量和抗体测定

　　攻毒后1、2、3、5、7 d 随机挑选3 只小鼠安乐死，用生理盐水对肺组织进行灌洗，取肺泡灌洗液( bronchoalveolar lavage fluid，BALF) 和肺、心、肝、脾、肾、脑、肠等组织接种到MDCK 细胞，观察细胞病变。攻毒后第14 天摘取眼球取血，离心取上清，用血凝抑制法( hemagglutination inhibition test，HI)进行抗体滴度测试［3］。

　　 6 白细胞计数

　　感染后1、2、3、5、7 d 摘取小鼠眼球取抗凝血进行白细胞总数和分类计数。

　　2. 7 统计学方法

　　数据以( 珋x ± s) 表示，数据应用SPSS 13. 0 软件包进行统计处理数据。组间比较采用方差分析的两两q 检验; 率的比较采用卡方检验。以P ＜ 0. 05 和P ＜ 0. 01 表示有统计意义。