动物模型,病毒性角膜炎 中国实验动物信息网 2020-08-03 1012

　　[建模机理]病毒性角膜炎（病毒性角膜炎）是*常见的单纯疱疹性角膜炎（HSK）。 HSK是由单纯疱疹病毒感染引起的致盲眼病，严重影响患者的视觉功能。其临床特征主要是长期反复发作，*终导致角膜白斑，角膜新生血管形成，角膜溃疡甚至穿孔。它严重损害了患者的视觉功能。目前，HSK的基础临床研究主要通过建立HSK动物模型来进行。建模方法主要包括角膜划痕接种和UV B曝光。

　　[建模方法]选择健康的雄性或雌性BALB/c小鼠，体重18-20 g，两只眼睛都没有结膜炎，角膜炎和其他眼部疾病。 I型单纯疱疹病毒（HSV-1），使用前的效价为2 x 1000000 pfu/ml。每天两次和一周后，将2.5 g/L氯霉素眼药水注入小鼠的眼睛。接种病毒之前，将小鼠角膜用10 g/L荧光素钠染色，并用裂隙灯显微镜检查，以排除具有角膜或结膜病变的小鼠。通过腹膜内注射水合氯醛麻醉小鼠。在显微镜下，用＃5手术刀的刀片在右眼的角膜上标记一个``＃''标记。建议穿透角膜上皮层。接下来，使用吸管添加5μl含2×1000000pfu HSV-1.DMEM的病毒，将其滴在右眼的角膜表面，并在闭上眼睑后，轻轻按摩30秒以完全去除病毒溶液。触摸角膜。建模后的第二天，连续两周每天两次给予2.5 g/L氯霉素滴眼液。然后，从第二天起连续3天将角膜用10g/L荧光素钠染色，并用裂隙灯显微镜确认角膜。 ）被检测到。检查病毒复制。对于上述模型动物，在2.5 g/L氯霉素眼药水的基础上，向右眼添加1 g/L阿昔洛韦眼药水，以连续2周每天两次降低HSK模型。促进治愈了小鼠的急性上皮角膜炎，该病毒在三叉神经节或角膜中建立了潜伏感染，建立了HSK潜伏感染模型。接种病毒后七周，对角膜和三叉神经节样本进行PCR证实，这是HSK潜伏感染的小鼠模型。麻醉右眼表面后，将其暴露于302m波长的UV光中3分钟。紫外线透射灯的输出为1.4mW /平方厘米，照射强度为250MJ /平方厘米。紫外线B照射后的第二天，将10 g/L荧光素钠连续染色7天，用裂隙灯显微镜观察角膜，用浸在DMEM中的棉签擦拭右眼角膜，并培养和观察HEK293T细胞。细胞病理学变化，以确定是否已成功建立HSK复发模型。  [模型特征]接种病毒后，角膜表现为点状，树突状或地图样病变，角膜擦拭HEK293T细胞显示出细胞病理学变化。也就是说，HEK293T细胞以葡萄的形状生长，圆形和聚集。 ，细胞部分的原始粘附生长被分离并悬浮在DMEM中，这被认为是原发性HSK感染。如果急性上皮角膜炎消失并且角膜和三叉神经节的PCR测试病毒为阳性，则建立HSK潜伏感染模型。如果在用UV-B射线照射后角膜产生斑点，树突或地图性角膜病变并且角膜擦拭培养基具有CPE，则认为已建立HSK复发模型。

　　[模型的评估和应用]该方法简单，建模率高，可以建立不同感染时期的HSK实验动物模型。尽管可以用兔子和小鼠来建立这种模型，但是研究表明，兔子很容易建立潜在的感染模型，但是倾向于自发复发。在小鼠建立的HSK潜伏感染模型中，不会发生自发复发。在潜伏感染的小鼠模型中，302m紫外线的反复照射不仅简单，有效且易于损坏，而且接近人类HSK复发的环境条件。这是进一步研究环境因素对人类HSK复发的影响及其预防和治疗的良好刺激。