基因修饰SLE,动物造模 中国实验动物信息网 2022-09-13 569

　　转基因小鼠模型B6.Cg-Tg（Actb-TNFRSF6B）754Jwu/J，基因敲入小鼠模型129S6.129X1（B6）-Ptprctm1Weis /和许多其他类型的用于研究自身免疫性疾病的转基因小鼠模型有。 J和B6.129X1-Ptprctm1Weis/J，基因敲除小鼠模型B6.129S6（Cg）-Cdkn1atm1Led/J，B6； 129S-Fcgr2btm1Ttk/J，条件基因靶向小鼠模型B6.Cg-Rxratm1Krc/J和20多个菌株。SLE是多种基因的遗传，目前的遗传修饰技术仅添加或敲除一个基因，因此其表型仅被部分模拟，从而导致人类SLE的临床表现和病理变化。很相似。此外，基因产物在人体不同器官中的表达可产生不同的生物学效应。除了预期的特定疾病表现外，基因的增加或缺失也可能引起其他病理变化。它从遗传学角度部分阐明和解释了SLE的病因。限制。

　　（I）转基因SLE小鼠B6.Cg-Tg（Actb-TNF-RSF6B）754Jwu/J

　　[建模机制]该小鼠品系在人β-肌动蛋白启动子的控制下表达人肿瘤坏死因子受体超家族6B（TNFRSF6B）基因。雌性小鼠表现出明显的狼疮样病状，其特征在于淋巴结病，脾肿大，抗核和抗dsDNA抗体以及肾小球肾炎。

      [建模方法]外源基因成分包括人β-肌动蛋白启动子，人TNFRSF6B cDNA和人β-肌动蛋白poly A信号。使用显微注射将外源基因成分注射到（C3HXC57BL/6）F1小鼠的雄性原核中。然后，将转基因小鼠与野生型C57BL/6小鼠回交，并将外源基因引入C57BL/6小鼠的背景。  [[该模型的特征]该转基因小鼠发展为类似于人SLE的自身免疫性疾病。具有异常细胞表型和脾肿大的淋巴结病在4至6个月之间发生。该表型主要发生在女性（64.5％）中，但仅发生在男性的20％中。其他症状包括抗核和抗dsDNA抗体，腹部B-1a亚型增加，具有IgG和C3沉积的肾小球肾炎，蛋白尿，血尿和白细胞减少症。随着月份的增加，出现皮肤病变，肝淋巴细胞浸润，贫血，白细胞和血小板减少症。 63％的女性和81.8％的男性生存了14个月或更长时间。

　　[模型的评估和应用]该模型可用于SLE的病因，病因，自身免疫性疾病的免疫调节以及SLE治疗药物的药效学研究。在实验中，将C57BL/6用作阴性对照。

　　（2）敲除SLE小鼠B6； 129S-Fcgr2btm1Ttk/J  [建模机制]低亲和力免疫球蛋白受体（FcγRII）广泛分布于淋巴细胞和骨髓细胞中，但其生物学学习的作用未知。如果B细胞缺乏该受体或其信号传导途径，则会导致对免疫复合物介导的抗体产生的反馈抑制作用减弱。 [建模方法]用具有新基因盒的靶向载体替换*对小鼠染色体的2.3 kb Fcgr2b（Fcreptor，IgG，lowaffinityⅡb）基因片段的“ S2”外显子，并使其功能失活。我会。该组分被电穿孔进入ES细胞。纯合突变小鼠的遗传背景是C57BL/6和129杂种。  [模型特征]该菌株的纯合小鼠正常发育，骨髓和淋巴结正常发育，引起对胸腺依赖性和胸腺非依赖性抗原的抗体应答，并增加免疫球蛋白。我会。小鼠对IgG引起的脱颗粒和被动性皮肤过敏反应敏感。 40％的小鼠在5个月大时有蛋白尿，90％的小鼠在9个月大时有蛋白尿。电击刺激的阈值降低，导致全身性癫痫发作。经过八个月大的病理检查，发现严重炎症和多器官浸润（肺，肾，唾液腺，胰腺，肝脏，血管，舌头，肌肉），脾脏和淋巴结肿大，血清抗核抗体滴度增加，死亡显示在9个月大时。弓背，水肿，脱水。  [模型评估和应用]该菌株的几种表型，例如自身抗体，与SLE相似，可用于研究SLE的病因和病因。此外，小鼠易受IgG引起的脱颗粒作用和易发生的皮肤过敏反应（可用于研究过敏反应）的影响。 B6129SF2/J用作阴性对照。

　　（3）条件敲除小鼠B6.Cg-Rxratm1Krc/J

　　[建模机制]类视黄醇X受体（Rxr）是核激素受体超家族（类视黄醇）的成员。 X样受体α（Rxm）是一种核受体，广泛参与基因转录活性的调节。它单独形成同二聚体或与其他核受体（视黄酸受体，甲状腺素受体，维生素D受体）相互作用。 ，过氧化物酶体增殖物激活受体和神经生长因子诱导受体）形成异二聚体并参与细胞信号传导。xra基因的敲除会影响体内许多基因的转录活性。在骨髓细胞系中敲除Rxra基因会导致自身免疫性疾病。

　　[建模方法]在Rxra靶基因第四个外显子的上游和下游插入loxP位点，并将下游loxP位点连接到PGK-neor。该组分被电穿孔进入ES细胞，并用Cre重组酶质粒短暂转染以去除选择盒。将在第4外显子两侧插入loxP的ES细胞注射到C57BL/6胚泡中。后代与缺乏特定遗传背景的转基因小鼠回交，该遗传背景至少包含一些C57BL/6遗传元件。使用C57BL/6回交至少10代。纯合小鼠正常发育和繁殖，没有任何生理或行为异常。如果需要相应的模型，则需要将此小鼠与特定的Cre重组酶小鼠交配，后代会在特定器官中产生Rxra基因敲除。与肝脏表达的Cre重组酶小鼠交配后，后代肝脏Rxra基因被敲除，可用于研究肝细胞增殖和肝脏再生。当与在骨髓细胞系中表达的Cre重组酶小鼠交配时，后代骨髓细胞系中的Rxra基因被敲除，可用于肾小球肾炎，自身免疫和SLE研究。

　　[模型的特征] 4-6个月大的雌性小鼠患有严重的肾病。肾脏扩张，肾小球细胞数量增加，凋亡细胞数量增加；肾小球的肾小球系膜基质扩张并增厚，IgG和IgM大量沉积，肾小球膜细胞增殖，巨噬细胞生长。浸润；ephron足突细胞足发生突变和融合。蛋白尿，尿液中含有白蛋白。血清中的抗核抗体，抗ssDNA，dsDNA和其他自身抗体增加，而循环肌酸增加。腹部巨噬细胞具有吞噬功能缺陷，吞噬体含量低和假足小，这会损害凋亡细胞的摄取和凋亡细胞的聚集。

　　[模型的评估和应用]该模型用于研究肾小球肾炎，自身免疫性疾病和SLE。在实验中，将C57BL/6用作阴性对照。 （4）敲入小鼠CD45E613R  [建模机制] CD45是在所有有核造血细胞中表达的受体样跨膜蛋白酪氨酸磷酸酶。 CD45E613R突变导致多克隆淋巴细胞激活，从而导致自身抗体增加，淋巴管增殖，严重的自身免疫性肾炎和死亡。杂合性和纯合性均可发展此病，表明CD45E613R是优势遗传。 [建模方法]通过基因靶向基因敲入策略将小鼠CD45基因的谷氨酸613突变为精氨酸（E613R）。将鼠CD45基因组片段谷氨酸613突变为精氨酸，并将在两侧含有loxP的neo盒插入下游内含子。该组分用于转染129个来源的ES细胞，用基因靶向替代内源性CD45位点。同源重组率为3/1200个克隆。将其中两个克隆显微注射到C57BL/6胚泡中以获得种系传播。将后代与β-肌动蛋白Cre转基因小鼠杂交以去除指甲盒。与C57BL/6交配后，去除了外源性β-肌动蛋白Cre基因，小鼠仅携带E613R突变，在下游内含子中插入了约140个核苷酸。这些小鼠称为CD45E613R小鼠。  [模型的特征]在3个月大时，脾脏浆细胞数量增加了4倍，T1细胞和T28细胞增加了。 6个月前的γ-细胞显示激活标记略有增加，在体内CD4和CD8 T细胞激活标记略有增加; CD8 T细胞对体外刺激高度敏感。回应。双阳性胸腺细胞对体外刺激高度敏感。在6个月时，CD4：CD8 T细胞比率≥1.5、CD44hi，CD62Llo和记忆T细胞大约增加了一倍。淋巴结肿大，卵泡B细胞对体外刺激高度敏感。在12个月大时，在小鼠的肝和肺血管周围发现了炎症浸润。

　　[模型的评估和应用]

　　该小鼠品系可用于免疫学和自身免疫性疾病的研究。

　　CD45E613R小鼠纯合子生长良好。但是，表型取决于遗传背景，在129X1/SvJ×C57BL/6突变的背景下，小鼠*早在15周龄时死亡，而43％的小鼠在50周龄之前死亡。 ..主要病理变化是T细胞和B细胞异常激活，粒细胞异常分化，脾脏和淋巴结肥大以及肾小球肾炎。在129S6的背景下，B，T和骨髓细胞在生物医学和细胞水平上均对刺激敏感。 B细胞发育偏向B1细胞系。发生了轻度的淋巴增生性疾病。